Adn

[invited5e9a664]

slt a tout le monde j ai une kestion ki me pose kelke petits probleme.
voila le probleme: je dois preparer un tampon de transfert des proteine sur une menbrane pour un test de type western. sachant ke la formulation de ce tampn est: 25mM de tris, 192mM de glycine et 20%(V/v) de methanol. on demande comment preparer 500 ml de ce tampon ( ja i reponde a la kestion) ensuite, on demande a quoi ca sert le methanol dans ce tampon. j ai trouvé ke c est agent ki precipite les proteine et solubilise le colorant, et c est un denaturant de l ethanole. mais mes reponses n ont pasl air d avoir un lien direct avec les donnes du probleme. est ce ke kelk un peux m aider?
-comme deuxieme question, j aimerai savoir quel est l'ingredien actif du trizol. est ce le phenol? et jaimerai savoir enfin quel est le risque chimique associé a ce reactif.
merci d avance pour vos reponses
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[invite71f23525]

Fais un effort de rédaction. Je te rappelle que le langage sms est interdit sur le forum.

LXR pour la modération

[invited5e9a664]

désolé c'est vrai. je vais faire un effort de redaction.
quelqu'un aurait il une reponse à mes questions svp?

[invited5e9a664]

voila mes question de nouveau mieux reformuler et avec une meilleur redaction.
salut a tout le monde j ai une question qui me pose quelques petits probleme.
voila le probleme: je dois preparer un tampon de transfert des proteine sur une membrane pour un test de type western. sachant que la formulation de ce tampon est: 25mM de tris, 192mM de glycine et 20%(V/v) de methanol. on demande comment preparer 500 ml de ce tampon ( j’ai deja repondu a cette question) ensuite, on demande a quoi ca sert le methanol dans ce tampon. j ai trouvé que c’est un agent qui precipite les proteine et solubilise le colorant, et c est un denaturant de l ethanole. mais mes reponses n ont pas l’air d avoir un lien direct avec les donnes du probleme. est ce que quelqu’un peux m aider?
-comme deuxieme question, j aimerai savoir quel est l'ingredien actif du trizol. est ce le phenol? et jaimerai savoir enfin quel est le risque chimique associé a ce reactif.
merci d avance pour vos reponse

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite71f23525]

Le méthanol permet de dissocier le SDS des protéines afin que celles-ci puisse se fixer sur la membrane grâce à des interactions hydrophobes non permises par le SDS collé aux protéines.

Pour le trizol, je n'utilises pas ce produit donc je ne saurais te renseigner.

Greg

[invite853321bf]

Pour le trizol non c'est tous les éléments qui sont actifs.
Guanidinium thiocyanate = inhibition d'enzymes surtout RNases d'après ce que je sais mais peut être aussi les protéases.
L'extraction des protéines (ou des acides nucléiques, ça repose sur le même principe) nécessite le phénol puis le chloforme mélangé avec un peu d'alcool isoamylique. Cela permet de séparer les protéines des acides nucléiques, ceux ci n'étant pas soluble dans le phénol ou chloroforme.
Pour plus d'infos http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2440339

Edit : pour les risques, il suffit de regarder les phrases de risque et c'est indiqué. En gros faut pas le boire, pas s'en asperger et faire attention aux plastiques qui ne sont pas spéciaux (en gros seuls les eppendorfs et falcon vont résister)

[Flyingbike]

le thiocyanate de guanidinium est un puissant chaotropique, ca permet effectivement de tout casser (particulierement les RNases). Le trizol s"'utilise sous hotte (phénol, chloroforme)