ARNm et résistance à la température

[invite50cb7a9c]

Bonjour,
Est-ce que les ARNm résistent aux températures élevés de l'ordre de 90°-100°C? En fait je teste un protocole de lyse cellulaire par congélation/décongélation pour extraire les ARN ensuite.
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[piwi]

Les cycles de congélation ne sont pas bons du tout pour les ARN. La congélation/décongélation/sonication c'est pour les protéines, pas pour les ARN.

[invite853321bf]

A ma connaissance les seuls ARNm assez costauds pour résister à ce genre de traitements seraient ceux des moisissures, et encore.
Sinon les ARNm son plutôt travaillés dans la glace, les RNases étant des protéines se retrouvant partout et très difficile à inhiber complètement. L'important dans ce genre de manip, c'est le froid et la rapidité. On m'a toujours dit que la demi vie des ARN bactérien était de quelques minutes à t° ambiante et vu la complexité de l'extraction, j'ai jamais cherché à affirmer ou infirmer celà
Mais même l'ADN, considéré comme plus stable, a une durée de vie assez réduite à des températures pareilles.

[invite50cb7a9c]

Ok, en fait c'est un protocole que j'ai trouvé pour faire une qRT-PCR sur une seule cellule. Cependant j'ai rajouté un inhibiteur de RNase, je verrais ce que ça donne...
Merci pour vos réponses

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite853321bf]

Les acides nucléiques sont souvent dégradés par les cycles de congélation / décongélation, de par la formation des cristaux de glace. Après ça dépend du nombre de cycles dont on parle bien évidemment.