Influence de la concentration en enzyme Calcul activité spécifique

[invite1149fb6f]

Bonsoir à tous.

j'ai réalisé un TP sur l'étude de l'influence de plusieurs facteurs sur la béta-galactosidase, et j'ai du mal à trouver mon activité spécifique...

par exemple pour le 1er tube:
Do à 405 nm = 0,151
Conc ONPG = DO/epsilon = 0,151/3500 = 4,3*10e-5 mol/L
on calcule la quantité d'onpg hydrolysé dans le tube, volume total 3,3 mL:
Qté ONPG = Conc * V = 4,3*10e-5 * 3,3e-3*10^6 = 0,14 µmol
la réaction se déroule en 3 min donc :
V = 0,14/3 = 0,047 µmol/min

pour l'enzyme, on ajoute 0,15 mL à 0,07 mg/mL (0,35 dilué au 1/5è). donc
Quantité d'enzyme = 0,0034 mg

d'où AS = 0,047/0,0034 = 13,8 µmol/min/mg ???
ça me parait très faible pour une AS...

je sens que j'ai fait une grosse erreur de calcul mais je ne la trouve pas... et je suis dessus depuis un moment !

si quelqu'un pouvait m'aider !

merci d'avance
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[Pfhoryan]

ça me parait très faible pour une AS...

je sens que j'ai fait une grosse erreur de calcul mais je ne la trouve pas... et je suis dessus depuis un moment !

Bonsoir,

Je n'ai pas vu d'erreur.
Il faudrait connaître l'AS de la ß-galatosidase pure ce qui te permettrait de déterminer le degré de pureté de ta préparation d'enzyme.
Par exemple, si une enzyme a une AS de 1000 µmol/min/mg quand elle est pure, et que tu ne trouves que 10 µmol/min/mg dans une préparation, c'est simplement parce que ton enzyme est pure à 1%.

[invite71f23525]

Si au cours d'une étape de purification l'enzyme a été partiellement dénaturée (à cause de conditions défavorables ou d'une erreur), la mesure de l'activité spécifique ne pourra donner qu'une information approximative voire fausse de la pureté de la protéine. On peut tout de même considérer que l'enzyme non fonctionnelle est une impureté... Donc tout dépend de quel point de vue on se place : du point de vue de la protéine (sous toutes ses formes) ou du point de vue de l'enzyme fonctionnelle. Enfin c'était juste une parenthèse en passant.

Greg