Calcul d'efficacité nécessaire en TaqMan ?

[invitec3be7f0b]

Bonjour à tous,

je vais bientôt me mettre au TaqMan pour quantifier des miRNAs. Mes précédents essais, en SYBR Green, ne m'ont pas permis de dépasser 82-83 % d'efficacité (il faut dire que la technique "maison" était un peu un bidouillage...)

Là, je ne cherche pas midi à 14 h, j'utilise les kits commerciaux prévus à cet usage de A à Z. En revanche, une technicienne de mon labo qui a l'habitude de la PCR quantitative m'affirme qu'en TaqMan, contrairement au SYBR Green, on n'a pas besoin de faire de test d'efficacité !!!
Ça m'étonne quand même énormément, alors si vous pouvez confirmer ou infirmer, ça m'arrangerait pas mal...

Merci !!
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[invitedef6ee4e]

tu as besoin du cacul d'efficacite de PCR (en taqman ou pas) si tu compare 2 PCR (2 couples de primer) differents et que tu veux relativiser l'un par rapport a l'autre.

Si la comparaison porte sur +/- traitement pour le meme amplicon, c'est deja moins necessaire, meme si c'est mieux de savoir pour ne pas comparer des PCR a 50% a des PCR a 100% d'efficacité.

[invitec3be7f0b]

Merci de ta réponse !
En fait, je vais utiliser un kit commercial (amorce de RT, amorce sens et anti-sens, sonde) désigné entièrement par le fabricant. Du coup, la représentante commerciale m'ont assuré que le calcul d'eff. n'était pas nécessaire, tant que je restais dans les fourchettes de sample indiquées (en l'occurence, 1 à 10 ng d'ARN total par réaction de RT).

Ce qui va grandement me simplifier la vie