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Sequencage produit PCR Exo SAP



  1. #1
    Cobalt

    Sequencage produit PCR Exo SAP


    ------

    Bonjour,

    J'ai une petite question, lorsque l'on sequence un produit PCR, on effectue au préalable un traitement Exo SAP. Pour l'exo je comprends, mais quid de l'utilisation de la SAP?

    Si je ne m'abuse la SAP, évite une circularisation de l'ADN par un jeu de déphosphorylation. Mais les ADN circulaires n'ont jamais été source de problèmes pour le séquencage. On effectue bien directement nos réactions d'élongation juste avant le séquencage directement sur nos plasmides circulaires.

    quelqu'un connait donc le rôle de la SAP dans ce cas précis?

    J'ai ma petite théorie, les produits pcr de petites tailles (genre 100-200pb) une fois circulaire sont bien trop petit pour que l'enzyme d'élongation puisse acceder et se positionner correctement sur la matrice (en gros la molécule une fois circulaire est trop rigide)

    Bonne journée

    -----

  2. #2
    Zellus

    Re : Sequencage produit PCR Exo SAP

    Bonsoir,

    La SAP est utilisée ici pour déphosphoryler les dNTP encore présents qui pourraient interférer avec la réaction de séquençage.

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