[Biochimie] utilité de manip de purification
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utilité de manip de purification



  1. #1
    invite656bc8e7

    utilité de manip de purification


    ------

    bonjour,

    une manip m'attends la semaine prochaine mais je n'ai pas compris tout le but de ce que je vais faire.

    Je vais purifier la B-lactamase TEM-1 de Escherichia coli.
    Je sais que la purification va etre controlée par calcul de facteur de purification et rendement donc par les AE et AS.

    Ce que je ne comprends pas c'est pourquoi je purifie la B-lactamase qui possège une queue poly-His par une chromatographie d'affinité sur résine Ni-NTA Agarose,
    puis, je dose l'extrait brut par bradford et l'extrait purifié par Kalckar
    et pour finir je mesure les AE dans les deux cas.

    pourquoi faire les 3 premieres étapes? la fin je comprends, c'est pour voir si la purification est réussie ou pas...

    merci d'avance =)

    -----

  2. #2
    invitedb325deb

    Re : utilité de manip de purification

    salut !

    la colonne de nickel permet de fixé les prot ayant une queue poly-histidine car cette queue formera un complexe avec le nickel.

    le dosage Bradford permet d'avoir la quantité totale de prot.
    Tu mesureras une activité enzymatique en fonction d'une quantité de prot, plus l'AE/mg de prot est forte, plus ta prot est pure.

  3. #3
    invite656bc8e7

    Re : utilité de manip de purification

    mais alors a quoi sert de faire toutes ces étapes si uniquement le dosage bradford est utile?...

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