Utilisation de l'ADNc

[invite9f0e4e7a]

Bonjour a tous,

je suis actuellement entrain d'etudier l'ADN complementaire et je me suis posé quelques questions auquelles j'ai pas trouvé de reponse precise sur le net.
Y a t'il d'autre utilisation d'adn complementaire hormis l'introduction de ces ADNc dans des plasmides pour l'obtention d'une grande quantité d'adnc ?

J'ai aussi vu qu'on extrait egalement des ARNm pour l'obtention d'un ADNc. Ma question va peut etre etre bete mais extraire un ARNm n'a t'il pas de consequence??

Merci d'avance
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[inviteb4e69e1e]

Qu'entends-tu par conséquence? de toute façon, la cellule sera lysée pour en récupérer le transcriptome, donc, pour elle ça va rien changer. Les seules différences c'est qu'en prenant le cDNA d'un mRNA c'est qu'on obtiendra le fragment cDNA sans les introns, puisque le mRNA aura déjà subit son épissage, et aussi que la formation du cDNA va nécessité une transcriptase inverse.

J'ai répondu à peu près à te deuxième question, ou c'est pas du tout ça que tu voulais dire?

[invite9f0e4e7a]

oui oui c'est exactement ce que je voulais savoir

Du tout en lisant votre reponse une autre m'est venue : pourquoi est ce si avantageur qu'il n'y ait pas de sequence introniques? car ds tout les cas lors du processus de transcription les sequences introniques disparaissent.

[Edelweiss68]

Bonsoir,

Et bien, sans les introns cela permet d'avoir des séquences plus faciles à manipuler (plus courtes).

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite9f0e4e7a]

C'est peut etre bete mais j'arrive vraiment pas a comprendre en quoi le fait qu'il n'y ai pas d'introns et dc avoir des sequences plus courtes est avantageux. Car dans meme si on a recours a l'ADNc pour etudier par exemple un gene ou pour l'obtention d'une proteine avec replication/trans/trad dans tout les cas les introns seront supprimés.

Je suis vraiment desolé de vous embetter avec ca mais je voudrais qur tout soit plus clair ds ma petite tete

[inviteb4e69e1e]

Comme l'a dit Edelweiss, c'est surtout que plus les séquences sont courtes, plus il est facile de les manipuler.
Moins de problèmes de PCR, moins de problèmes pour les intégrer dans des plasmides, moins de problèmes pour la transfection (plus le plasmide est gros, moins la transfection est efficace), moins de problèmes pour choisir des enzymes de restrictions qui ne coupent pas à l'intérieur de notre séquence d'intérêt, et j'en passe.

Ya surement pleins d'autres raisons de travailler avec des cDNA provenant de mRNA, mais je n'ai pas encore assez de contact avec le labo pour en savoir beaucoup plus...

[Flyingbike]

la raison principale c'est quand même la quantification. Pour quantifier des messagers, on est obligés de passer par les cDNA puisqu'on ne peut pas amplifier directement les messagers.