Bonjour,
Je suis en difficulté pour un exercice portant sur une transformation de Scatchard. Le but est de calculer le Kd et Bmax d'un récepteur à une hormone, par méthode de saturation.
L'expérience consiste à mélanger 100µL de cytosol d'une préparation de cellules avec 50µl d'hormone radiomarquée (à une concentration variable selon les tubes) et 50µL de tampon (fixation totale) ou d'hormone hyperconcentrée (fixation non spécifique).
La séparation libre liée se fait par filtration au charbon dextran.
On part de résultats comprenant les concentrations initiales en hormone radiomarquée, et les mesures de radioactivité en dpm (pour la fixation totale et la fixation non spécifique) après filtration.
On a également un tableau de comptages de solutions radioactives à diverses concentrations en hormone radiomarquée permettant de faire la conversion dpm=>pmol/L.
Après deux petits calculs, on a donc la concentration en hormone radiomarquée dans chaque tube et la concentration en hormone liée au récepteur de façon spécifique (cf tableau plus bas).
Par soustraction de la concentration en hormone liée B à la concentration intiale en hormone on obtient la concentration en hormone libre dans chaque tube.
Et en faisant le rapport lié/libre B/F on a alors tous les éléments pour faire une transformation de Scatchard en traçant B/F = f(B).
Seulement ma droite... n'est pas tellement droite :/
Je ne comprends pas trop d'où vient l'erreur, les calculs sont pourtant simples à priori.
Quelqu'un sait-il si c'est normal d'avoir des droites "moches" avec cette transformation, et si cette espèce de cloche est utilisable quand même?
Autre question au passage : en cherchant des exercices corrigés sur le net, j'ai vu de nombreux sites qui décriaient cette transformation en disant qu'elle décuplait les erreurs expérimentales et n'était donc pas fiables pour déterminer les Kd. Y a-t-il d'autres moyens de procéder pour les calculer, en évitant Scatchard?
Merci d'avance pour votre aide!
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