Marquage To-Pro pour FACS

[invite6db66ef2]

Bonjour,

On m'a proposé d'utiliser le marqueur To-pro pour mesurer, au FACS, la proportion de cellules apoptotiques contenues dans mes échantillons.
Je me demandais si certains d'entre vous avaient déjà utilisé ce marquage et ce qu'ils en avaient pensé.
Merci d'avance pour vos réponses ^^
-----

[invite50cb7a9c]

j'ai utilisé le To-Pro3 pour marquer les noyaux en IF, il pourrait servir dans ce cas à identifier les cellules apoptotique (noyaux picnotique, chromatine condensée) mais en FACS je ne vois pas comment, j'attends la réponse également

[invite6db66ef2]

En fait, To-Pro3 est un marqueur qui traverse la membrane mais qui, dans des cellules non apoptotiques, est immédiatement pompé hors de la cellule. En revanche, dans les cellules apoptotiques, la perte d'asymétrie de la membrane entraîne un dysfonctionnement des canaux transmembranaires qui fait que To-Pro3 peut s'accumuler dans le cytoplasme.
Ensuite on fait la distinction entre cellules apoptotiques et necrotiques grâce à un autre marqueur (ex : Iodure de propidium)
Quand j'aurai plus de temps je posterai quelques références