Bonjour,
En ce moment au labo, j'essaye d'obtenir une co-localisation de deux protéines par immunofluorescence dans des cellules leucémiques. Le problème est que le cytospin utilisé pour attacher les cellules sur une lame déforme les cellules. Le noyau a une forme correcte mais dans le cytoplasme, mes protéines ne localisent pas de manière précise comme c'est le cas pour des cellules adhérentes. C'est problématique car pour démontrer une colocalisation, il vaut mieux avoir un marquage précis.
Dans la littérature, j'ai pu voir plusieurs techniques et étonnamment, le cytospin ne semble pas être la méthode de choix. Il est fréquent que les auteurs attachent leurs cellules sur des lamelles coatées avec de la polylysine. Si vous connaissez la méthode cela m'aiderait bien. Aussi, une publication d'une équipe anglaise attache ces cellules à la lamelle en déposant 30 µl de suspension cellulaire sur la lamelle puis en la faisant sécher à l'air, suivit de la fixation au PFA. C'est assez original! Cependant, dans tous les cas je ne trouve pas leur images prises au confocal très jolies, les localisations protéiques ressemblent plus à des amas flous qu'à des points bien focalisés.
Je fais donc appel à vos lumières pour m'aider à résoudre ce problème s'il est résolvable.
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