Bonjour,
pour mettre en évidence la présence de NFKB dans le noyau par immunofluorescence indirecte, je dois fixer les cellules , les perméabiliser puis je les mets en présence d'anticorps anti NFKB (anticorps primaire), mais pour l'anticorps secondaire, je mets un anticorps qui s'exprime contre l'anticorps qui s'est fixé sur NFKB?Cet anticorps secondaire doit étre fluorescent,avec quelle molécule dois-je le coupler?
Merci
Pourquoi voulez vous faire le couplage vous même? On trouve des anticorps commerciaux déjà couplés. Pour le choix du fluorochrome c'est à vous devoir avec les filtres dont vous disposez. Chez nous, par exemple, on utilise souvent Cy3 en première intention.
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
c'est une question de mon tp, je dois décrire le protocole pour mettre en évidence par immunofluorescence indirecte la présence de NFKB dans le cytoplasme et le noyau.
Merci d'avance
Hello à tous;Envoyé par Cons2
Oui tu dois mettre un anticorps qui s'exprime contre l'anticorps qui s'est fixé sur NFKB (et qui est spécifique de l'isotype de l'anticorps primaire).
L'anticorps secondaire pourra être un anticorps de lapin conjugué à la fluorescéine (marquage vert) ou à la rhodamine (marquage rouge ou rose) et dirigé contre les IgG de souris par exemple (si l'anticorps primaire est un anticorps de type IgG produit par la souris et dirigé contre une protéine du cytosquelette comme l'actine).
Cordialement,
Katie.
Je ne comprends pas pourquoi vous parlez de l'actine?
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
Hello à tous;
C'été juste un exemple dans l'application de l'immunofluorescence
Cordialement,
Katie.
