Biologie cellulaire proteine

[invite71ea6bef]

Bonjour
Quel est à votre avis la méthode que l'on doit utiliser pour localiser une proteine dans une cellule ? Je pensais à l'immunofluorescence ...
Merci beaucoup pour votre aide
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[piwi]

Immunofluo pour l'histologie, immunogold si on cherche une localisation en microscopie électronique. On peut aussi faire un tag-GFP. Promega a mis au point un autre tag dit HaloTag qui permet de réaliser le couplage avec un fluorochrome tout en gardant la cellule en vie. On peut traquer la protéine in vivo et jouer un peu avec différents fluorochromes. Voilà pour un rapide survol.

[invite71ea6bef]

Merci beaucoup pour votre rapidité . Il s'agit de localiser une proteine présente dans des cellules cerebrales . A quelle méthode pensez vous plus particulierement dans ce cas là ? Merci de m'éclairer

[invite75e918c6]

Avec une fusion traductionnelle avec le GFP ou le (par création d'un gène chimère en association avec le gène codant pour la protéine d'intérêt ;-D )

[A voir en vidéo sur Futura]

[piwi]

En première approche l'immunohisto est pas mal. Maintenant si cette protéine ne diffuse pas vous pouvez aussi faire de l'hybridation in situ des transcrits. Vous n'aurez pas la protéine proprement dite mais vous aurez le profil d'expression. L'intérêt est que vous pouvez toujours faire une hybridation in situ alors que vous êtes dépendant des anticorps pour l'immuno.

[invite71ea6bef]

Avec une fusion traductionnelle avec le GFP ou le ? Je crois qu il manque un mot ...
Je pensais au GPF mais j'etais hesitant . Merci beaucoup

[invite75e918c6]

Avec une fusion traductionnelle avec le GFP ou le (par création d'un gène chimère en association avec le gène codant pour la protéine d'intérêt ;-D )

Mince... j'ai oublié un mot...

avec la GFP ou le glucuronidase qui en présence d'un substrat, donnera une couleur bleue

[invite71ea6bef]

A Piwi
Merci pour tous ces renseignements . La proteine diffuse .
Est ce un handicap d'etre dependant des anticorps ?

[invite71ea6bef]

Merci beaucoup

[piwi]

Le problème des anticorps c'est qu'il faut déjà qu'ils existent et ensuite qu'ils fonctionnent. C'est pas toujours évident.

[invite71ea6bef]

ok merci beaucoup .Sauriez vous aussi comment on peut determiner si la localisation de cette proteine peut etre affectee par la presence de neurotrans metteurs ? Merci encore

[invite75e918c6]

??? J'ai du mal à saisir, comment des neurotransmetteurs pourraient affecter la visualisation de la localisation de la protéines d'intérêt? Tu penses à des bruits de fond de la fluorescence?

[invite71ea6bef]

Pas la visualisation , la localisation .
Merci