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Biologie cellulaire proteine



  1. #1
    petion

    Biologie cellulaire proteine

    Bonjour
    Quel est à votre avis la méthode que l'on doit utiliser pour localiser une proteine dans une cellule ? Je pensais à l'immunofluorescence ...
    Merci beaucoup pour votre aide

    -----


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  3. #2
    piwi

    Re : Biologie cellulaire proteine

    Immunofluo pour l'histologie, immunogold si on cherche une localisation en microscopie électronique. On peut aussi faire un tag-GFP. Promega a mis au point un autre tag dit HaloTag qui permet de réaliser le couplage avec un fluorochrome tout en gardant la cellule en vie. On peut traquer la protéine in vivo et jouer un peu avec différents fluorochromes. Voilà pour un rapide survol.
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  4. #3
    petion

    Re : Biologie cellulaire proteine

    Merci beaucoup pour votre rapidité . Il s'agit de localiser une proteine présente dans des cellules cerebrales . A quelle méthode pensez vous plus particulierement dans ce cas là ? Merci de m'éclairer

  5. #4
    VilCrocrotte

    Re : Biologie cellulaire proteine

    Avec une fusion traductionnelle avec le GFP ou le (par création d'un gène chimère en association avec le gène codant pour la protéine d'intérêt ;-D )
    VilCrocrotte !! Le super Génie !!

  6. #5
    piwi

    Re : Biologie cellulaire proteine

    En première approche l'immunohisto est pas mal. Maintenant si cette protéine ne diffuse pas vous pouvez aussi faire de l'hybridation in situ des transcrits. Vous n'aurez pas la protéine proprement dite mais vous aurez le profil d'expression. L'intérêt est que vous pouvez toujours faire une hybridation in situ alors que vous êtes dépendant des anticorps pour l'immuno.
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    petion

    Re : Biologie cellulaire proteine

    Avec une fusion traductionnelle avec le GFP ou le ? Je crois qu il manque un mot ...
    Je pensais au GPF mais j'etais hesitant . Merci beaucoup

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  10. #7
    VilCrocrotte

    Re : Biologie cellulaire proteine

    Citation Envoyé par VilCrocrotte Voir le message
    Avec une fusion traductionnelle avec le GFP ou le (par création d'un gène chimère en association avec le gène codant pour la protéine d'intérêt ;-D )
    Mince... j'ai oublié un mot...

    avec la GFP ou le glucuronidase qui en présence d'un substrat, donnera une couleur bleue
    VilCrocrotte !! Le super Génie !!

  11. #8
    petion

    Re : Biologie cellulaire proteine

    A Piwi
    Merci pour tous ces renseignements . La proteine diffuse .
    Est ce un handicap d'etre dependant des anticorps ?

  12. #9
    petion

    Re : Biologie cellulaire proteine

    Merci beaucoup

  13. #10
    piwi

    Re : Biologie cellulaire proteine

    Le problème des anticorps c'est qu'il faut déjà qu'ils existent et ensuite qu'ils fonctionnent. C'est pas toujours évident.
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  14. #11
    petion

    Re : Biologie cellulaire proteine

    ok merci beaucoup .Sauriez vous aussi comment on peut determiner si la localisation de cette proteine peut etre affectee par la presence de neurotrans metteurs ? Merci encore

  15. #12
    VilCrocrotte

    Re : Biologie cellulaire proteine

    ??? J'ai du mal à saisir, comment des neurotransmetteurs pourraient affecter la visualisation de la localisation de la protéines d'intérêt? Tu penses à des bruits de fond de la fluorescence?
    VilCrocrotte !! Le super Génie !!

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  17. #13
    petion

    Re : Biologie cellulaire proteine

    Pas la visualisation , la localisation .
    Merci

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