Interaction entrée viral protéine cellulaire
Bonjour,
j'aimerais de l'aide au sujet de l'étude de l'interaction entre un virus et la cellule hote. Pensez vous que l'on peut utiliser une approche de protéomique pour l'étude des protéines cellulaires impliquées??
Peut-on faire de la protéomique avec un contact virus-cellule??
Merci beaucoup
Hello piloupilou,
On pourrait.....voilà ce que je te propose :
On a identifier une proteine x exprimée à la surface de ton virus adoré, et on souhaiterait identifier les protéines exprimées à la membrabe plasmique de ta cellule hôte avec lesquelles x interagit.
1ere étape : produire par biologie moléculaire (par E.coli par ex) la protéine x.
2ème étape : purifier à partir de la cellule hôte la membrane plasmique.
3ème étape : co-incuber les membranes avec la proteine x
4ème : effectuer le pull-down de x/protèines membranaires avec un anticorps dirigé contre x.
5ème : résoudre le pulldown par electrophorese à 2D
6ème : identifier les protèines par spectro de masse de type MS/MS
7ème : écrire un papier !!!!!!
Je te laisse deviner l'expérience controle qu'il faut faire pour que cette approche puisse avoir l'air un tantiné (ca s'ecrit comme ça ??)serieux !
A+
Salut, je te remerci de ta réponse et c'est déjà ce que je pensais mais je doutais, par contre la 1iere D doit etre fait dans des conditions dénaturante comme le BN-Page. Et apres il faut que je vérifie si la ou les protéines identifiés servent dans l'infection virale.
Encore merci et a plus
moralité, il faut toujours poser les questions de facon "précise" pour qu'on puisse y répondre "précisement.
A+
Salut,
"Tantinet"
@+
Juste quelques commentaires rapide, il se fait tard...
Quitte a synthetiser une proteine recombinante autant faire un pull-down avec une fusion GST-proteine X. Si tu utilises une etape anticorps, ne pas oublier de cross-linker l'anticorps avant l'IP... Un autre detail, identifier des proteines membranaires par mass spec n'est pas une partie de plaisir... des techniques specifiques sont requises puisque les proteines membranaires ont une facheuse tendance a ne pas se solubiliser facilement et a avoir un caractere hydrophobe. Enfin, l'etape 2D n'est pas forcement indispensable, tout depend de la technique de detection derriere... (MALDI-TOF (2D), Electrospray (1D suffit))...
