Production d'interleukine 2
Bonjour a tous !
Je cherche quelles sont les méthodes disponible afin de synthétiser de l'interleukine 2 dite recombinante, dasn un système eucaryote.
Je me pose aussi la question, est-il possible de produire Il-2 dans un système procaryote (E.coli par exp),
Autrement dit, est-ce-que la production d' Il-2 nécessite des modification poste transactionnel ?
Mercii bien pour vos réponse =)
Et bien comme toute proétine recombinante produite chez des eucaryotes ils faut passer par un vecteur type plasmidique ou virale porteur de la séquence codante de l'IL2 afin de la produire. Afin d'en faciliter la purification tu peux la tager (ex: tag 6His ou autre).
La production de protéines recombinantes est une technique courrament utilisée dans les labos de recherche.
J'ajouterais qu'une production en cellule procaryote me parait-être peu intéressante: cette protéine est glycosylée à différents niveaus, et d'après une brève recherche sur google cela a une forte incidence sur son activité biologique. De plus, je ne suis pas pour la production de protéine de cette taille en cellules procaryotes (problème de production en corps d'inclusions...).
En espérant avoir pu t'aider !
Merci bien, je prendrai les éléments que tu m a donner comme ébauche pour mes recherches.
je t'avoue que j'ai beaucoup de mal a trouver les bons mots clés pour trouver la structure de l'Il-2 et sa synthèse qu'elle soit in vivo ou in vitro (Il-2 recombinant) je tombe toujours sur les application de cette dernière :s
Les mots clé que j'ai utiliser sont: Production , génie génétique, synthèse, système eucaryote, il-2 recombinant, ...
j'ai un peu "mixer" le tout mais je n'arrive toujours pas a trouver grand chose :s
Pour la structure cherche par "structure il2"...tu trouveras de belles images de RMN...Envoyé par TheDinabel
La synthèse d'une protéine in vivo c'est la synthèse naturelle d'une protéine, tu devrais donc rechercher les cellules qui la produise, dans quelles circonstances etc...
La synthèse vitro (protéine recombinante) c'est tout autre chose, voici un petit résumé du mode opératoire:
Il faudrait déjà que tu choisisses ton système de production (eucaryote me parait le mieux..), que tu choisisses ton vecteur (un plasmide me parait pas mal, avec un tag pour la purification), que tu trouves la séquence cDNA de l'IL2 (sequence CDS sur pubmed), que tu définisse ta stratégie de clonage (les bonnes enzymes de restriction en fonction de ton plasmide et de ton insert), tu fais une ligation, puis une transformation en bactérie. Puis tu fais une culture sur boite de petri avec une sélection par un antibiotique correspondant à ton plasmide. De la tu repiques une colonie et tu fait une culture liquide à partir de cette dernière. A cette étape il est important de valider ta construction par un séquençage et une PCR, après avoir extrait une petite quantité de ton plasmide (ex:5ml de culture extrait par mini prep).
Une foi validé, fait une plus grosse culture (500ml) puis une maxi prep... Là, tu as (enfin) un plasmide...complet et validé.
Pour produire la protéine à partir de là, il faut que tu réalises une transfection en cellule eucaryote (HEK293 par exemple) en utilisant un agent de transfection (lipofectamine...). Tu appliques également une pression de sélection par un antibiotique. Là il va falloir attendre un peu et comparer la mortalité de tes cellules avec des HEK non transfectées également sous antibiotique.
L'Il2 étant sécréter, cela va te simplifier la vie... Après ta sélection, tu peux prendre ton surnageant de culture, le concentré un peu (centricon) et réaliser une analyse par électrophorèse SDS PAGE ou encore mieux en western blot afin de valider que tes cellules produisent ta protéine.
Ensuite, à partir d'une bonne culture (plusieurs fois 100ml par exemple), tu pourras récupérer ton surnageant, le concentrer de nouveau et le purifier selon la méthode la plus appropriée en fonction de ton tag.
Tu valides sur gel ou par western blot, et voilà! après plusieurs semaines de dur labeur tu as produit ta protéine ! Il ne te reste plus qu'à en tester l'activité sur une lignée cellulaire sensible à l'IL2...
C'est du boulot...la bio !!
Si tu as des questions n'hésites pas
Enjoy !
Dernière modification par Chewee ; 30/10/2010 à 13h08.
merciiiiiiii, tu es géniale
On fait s'kon peutmerciiiiiiii, tu es géniale
Bonjour,
J'ai une note de synthèse sur la protéine recombinante interleukine-2 à faire et sur le net je ne trouve aucun article ou document décrivant la production de cette protéine en grande quantité dans E.coli. Quelqu'un pourrait-il m'aider?
Je vous en remercie d'avance !!
N'as tu pas la possibilité de produire en eukaryotes? (HEK293 par exemple). Entre la maturation des protéines et les corps d'inclusions j'ai peur que tu sois limitée chez e.coli..
Dernière modification par Chewee ; 13/02/2015 à 19h42.
Enfete je ne dois pas le faire moi même mais simplement trouver ce qui se fait déjà en laboratoire.
