TP enzymologie

[takata75]

Bonjour

J'ai fais un tp d'enzymologie et j'ai du calculer la vitesse initiale grâce à la formule:
Vi=(1/(epsilon*l))*(deltaA/deltat)
La prof nous a rendu le tp et j'ai eu faut mais je ne comprends pas pourquoi. Voici mon calcul
deltaA/deltat=(0,46-0,45)/(10-0)
deltaA/deltat=0,001s^-1epsilon=1,8*10^-4L/mol/cm
Vi=(1/(1,8*10^4*1))*0,001
Vi=5,5*10^-8mol/L/s=55nmol/L/s
Je ne comprends pas où est mon erreur mais je sais que j'aurais du trouver 0,55nmol/L/s.
J'ai un autre TP que je dois rendre demain et j'ai le même calcul à faire avec d'autres chiffres et je voudrais pas me tromper.

Est-ce-que quelqu'un aurait la gentillesse de me dire où est mon erreur?

D'avance,
merci
-----

[Edelweiss68]

Bonsoir,

D'où sort ta formule ? Quelles sont tes données ?

deltaA/deltat=0,001s^-1epsilon=1,8*10^-4L/mol/cm

Et ça, ça sort d'où ?

[invite75e918c6]

simplifions l'écriture car j'ai mal aux yeux

delta = d

donc dA/dt c'est la vitesse, donc à mon avis c'est par rapport à la tangeante sur sa courbe A = f(t)

sinon d'après beer lambert

A=E*l*c
donc c= A/(E*l) et c/dt = dA/(E*l*dt)

et je rejoins la fleur des montagne mais d'où sort tu dA/dt=0,001s^-1epsilon=1,8*10^-4L/mol/cm ??

[takata75]

Bonjour,

Ma formule pour calculer la vitesse initiale c'est la prof qui nous l'a donné.
C'est par rapport à la loi de beer lambert A=epsilonlC
où k est la pente dans mon exo k=deltaA/deltat
et epsilon=deltaA/deltaC*l
ici c'est pas deltaC mais deltat
voila
Le reste les chiffres c'est ce qu'on a calculer dans un tableau.

epsilon=1,8*10^4^L/mol/cm
voila est-ce plus claire pour m'expliquer?

[A voir en vidéo sur Futura]

[takata75]

En faite:


Je pense que pour ce genre de formule alambiquée il est bon d'utiliser la mise en forme LaTeX. Toutes les informations sont ici: http://forums.futura-sciences.com/an...e-demploi.html

A titre d'exemple j'ai corrigé la formule dans ce message.

Pour la modération,
piwi

[invite75e918c6]

Utilise delta = d, c'est plus claire pour les yeux ^^

As-tu vérifié si tu n'avais pas de facteur de dilution (enfin le résultat aurait été pire) ou meme ne serait-ce une erreur de conversion des unités?

[takata75]

J'ai tout vérifié et je ne vois pas du tout où est mon erreur.
Je sais juste que la droite doit passer par l'origine et là elle ne passe pas par l'origine. Est-ce-qu'il ne faut pas mettre l=10^3 et non l=1cm?

[Edelweiss68]

Est-ce-qu'il ne faut pas mettre l=10^3 et non l=1cm?

Ben non puisque ton ε est en L/mol/cm.

[takata75]

Alors est ce que tu vois ou est mon erreur pourquoi je trouve pas Vi=0, ?

[Edelweiss68]

Le calcul final est juste mais c'est un peu le brouillon dans vos explications et je pense que l'erreur vient de ce manque de clarté. Relisez bien l'énoncé depuis le début, vérifiez vos données et regardez que cela colle au niveau des unités (métrologie).

[invite75e918c6]

Ta droite ne passe pas par l'origine?.... tu mesures quoi exactement, l'apparition ou la disparition du produit en fonction du temps?

De plus, ce n'est pas un facteur 1000 mais un facteur 100 de différence... et bidouiller les cm pour les mettre en décamètre... bon c'est moyen ça ^^
A moins que c'était en unité internationale ton epsilon où L s'exprime en metre et non en centimetre (1 cm = 10^-2 m)

[takata75]

En fait dans mon tp j'ai préparé des dilutions de la solution enzymatique:
Préparer dans des tubes à hémolyse 1mL de dilution de la solution mère e PAL à 10mg/L au 1/5,2/5,3/5,4/5,5/5 en tampon DEA pH=9,8.
Conserver ces solutions dans la glace.

Déterminatin de vi pour chaque dilution de la PAL:
Les mesures de vi sont réalisées par cinétique en temps réel au spectrophotomètre à 405nm.
Dans une cuvz de spectrophotomètr, introduire:
1mL de solution de pNPP à 50mmol/L
2,4 de tampon DEA à pH=9,8
Vérifier que le spectro est réglé à 30°C en mode cinétique.
Régler le zéro optique su spectro sur l'air.
Pré-incuber la cuve de mesure 2 minutes à 30°C dans le porte cuve du spetro.
Sortir la cuve pour déclencher la réaction par ajout de 0,1mL d'enzyme.
Relever les valeurs toutes les 15s pendant 120 secondes.
tableau:
Dilution de la solutio,n mère 1/5
rhopal de la solution fille (mg/L) 2
volume de la solution mère de Pal(mL) 0,2
volume de tampon DEA pH 9,8(mL) 0,80
[PAL] dans le milieu réactionnel(mg/mL) 0,11

temps(en s) 0 15 30 45 60 75 90 105 120
Absorbance à 405nm
Dilution 1/5 0,450 0,465 0,480 0,396 0,512 0,528 0,544 0,563 0,577

Déterminer graphiquement dA/dt en s^-1
Calculer Vi en nmol/L/s avec epsion=1,8*10^4L/mol/cm
[PAL] dans le milieu réactionnel(mg/L) 0,11
dA/dt(s^-1) 0,001
Vi(nmol/L/s) 55,5
C'est le 55,5 qui me choque parce que j'ai vu chez une camarade qui a eu une meilleur note que moi qu'elle trouvait 0, et je vois pas du tout où est mon erreur.
Pouvez-vous m'aider en ayant tout l'énoncé?

Merci

[invite75e918c6]

Qui te dis que le résultat Vi=O est bon? au moment où tu vois un changement d'absorbance, tu as une activité. Ne compare jamais les résultats expérimentale avec les autres, seulement leurs démarches

Si ta droite ne passe pas par l'origine (c'est juste un détail) c'est parce que tu as fait le blanc avec l'air et non avec la solution sans l'enzyme

Ensuite, je vois qu'il y a une dilution (il faut toujours en prendre en compte !)

dA/dt tu l'as trouvé.... j'ai pas trop la tête à réfléchir ce soir (surtout que je sors d'une opération) et je ne vois pas trop le problème (ça m'a l'air correcte ce que tu avances,) je te conseille de sollicité ton/ta prof en lui montrant ta démarche ;-D