Marquage d'une sonde

[invite57cecb71]

Bonjour,

Je n'ai pas vraiment compris le principe du Random Priming:
lors du random Priming (ou marquage par multi amorçage), est-ce que les brins synthétisés par la polymérase à partir des amorces vont se lier à la fin par une ligase, ou bien l'ARN polymérase va-t-elle hydrolyser les amorce ce qui va coller tous les brins, ou bien les brins restent séparés?

Si les brins restent séparés, comment ça se fait que la polymérase ne les collent pas? De plus, si les brins sont séparés lors de ce marquage de la sonde, on peut utiliser n'importe quel brin pour marquer le gène pour lequel on a fait la sonde, ou bien faut utiliser tous les brins pour que ça puisse reconnaître le brin d'ADN qu'on veut?

Une autre question qui n'a pas de rapport avec le sujet:
Les facteurs de transcription agissent-ils seulement au niveau de l'ARN polymérase au niveau des séquences promotrices ou bien aussi sur d'autres séquences qui peuvent être loin de la séquence promotrice?
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[inviteb1d0d200]

Bonjour,

est-ce que les brins synthétisés par la polymérase à partir des amorces vont se lier à la fin par une ligase, ou bien l'ARN polymérase va-t-elle hydrolyser les amorce ce qui va coller tous les brins, ou bien les brins restent séparés?

bonjour,

Au fait, dès que l'ADN polymérase rejoint l'amorce ARN qui suit, elle enlève l'amorce en remplaçant les nucléotides de l'ARN par des nucléotides de l'ADN, grâce à l'intervention de l'important système de réparation de l'ADN et les propriétés de l'ADN polymérase, puis elle se détache. Des ligases relient les nucléotides des 2 fragments adjacents de telle sorte que la chaîne nouvellement formée soit continue et fidèlement complémentaire de la chaîne matrice.

j'espère que ça répond à cette partie

[inviteb1d0d200]

Bonjour,



Une autre question qui n'a pas de rapport avec le sujet:
Les facteurs de transcription agissent-ils seulement au niveau de l'ARN polymérase au niveau des séquences promotrices ou bien aussi sur d'autres séquences qui peuvent être loin de la séquence promotrice?

à propos de celle là, il ya des séquences régulatrices: enhancers (stimulatrices) et silencers (inhibitrices) qui se trouvent à -100 paires de bases à peu près, il en existe aussi au niveau du gène/séquence à transcrire qui est en aval du promoteur... La transcription est sous contrôle des protéines régulatrices synthétisées par des gènes régulateurs..

alors?...

[invite57cecb71]

Il me semble que dans l'ARN polymérase mis, on la modifiée de sorte qu'elle ne présente plus soit l'activité ADNas ou ARNase. Par hasard tu saurais c'est laquelle? Je ne m'en souviens plus

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite57cecb71]

Désolé j'ai encore quelques questions:

Sinon au niveau de la nick translation et de la technique du PCR, lorsqu'on met la polymérase, on sait pas à combien de bases elle va arrêter de transcrire le brin matrice? Donc à la fin de ces deux techniques, il y aura pleins de fragments de tailles variables dans le tube? De plus la longueur de la sonde va varier puisque la polymérase lorsqu'elle va "créer" les sondes (en supposant qu'on veuille faire plusieurs sondes pour un même brin matrice) elle ne va pas toujours s'arrêter aux mêmes endroits. Au final, si on révèle tout ces brins sur une technique sur gel d'agarose par autoradiographie, on va avoir des bandes autoradiographiques partout non, puisque le poids moléculaire des sondes formées seront différentes? Et au final comment alors on peut connaître la taille de l'ADN matrice puisque sur le gel d'agarose on a la taille de la sonde + celle de l'ADN sur lequel la sonde s'est accroché.

Je sais pas si c'est claire ^^"