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difference de detection



  1. #1
    karimKO

    difference de detection

    JE VOUDRAIS SAVOIR QUEL SONT LES DIFFERENCES AU NIVEAU DES SEUIL DE DETECTION POUR:
    -detection des proteine total par le bleu de coomassie
    -le western blot (transfert sur mb)
    -phast gel
    je voudrais savoire aussi pourquoi je ne vois pas tres bien voir pas du tous la bande de la proteine recherché sur resultat gel exposé au bleu de coomasie alors que la bacterie a étè induite alors que pour le temoin + QUI LUI AUSSI A étè induit on la voit trés bien.
    AIDE MOI S'IL E PLAIT

    -----


  2. #2
    Emilietoc

    Re : difference de detection

    Bonjour. En théorie avec le Coomassie tu peux détecter jusqu'à 100ng et avec le western blot, jusqu'au picomol ou même femtomol, selon ton révélateur (ECL) et bien sûr selon la qualité de tes anti-corps. Je ne connait pas le phastgel.
    Pour tes problèmes de détection, il faut savoir si ton échantillon induit et ton échantillon contrôle ont été traités de la même manière. Il faut concentrer la protéine: culotter les bactéries puis les reprendre dans du laemmli (je fais 1ml de culture, centri, reprise dans 200ul laemmli 1X, centri, dépôt de 10-20ul). Sinon tu peux avoir des problèmes de solubilité, mais si la protéine a déjà été produite, il n'y a aucune raison.

  3. #3
    karimKO

    Re : difference de detection

    MERCI
    EN FAITE AU COUR DE L’expérience notre concentration de protéine total était de 5,97 ug/ul (mesure realisé au nanotrop).ON VEUT OBTENIR DANS 15 ul 35 ug .PAR CALCUL CiVi=CfVF .ON A DEDUIT QUIL FALLAIT AJOUTER 33,5ul de nos proteine purifier et ensuite complété avec notre solution tampons de lyse pour avoir un volume final de 40 ul . on a ensuite preparé 2 TUBE DE 15 UL davec ajout de 5 ul de bleu de charge POUR FAIRE DEUX GEL .UN EST EXPOSé a la coloration coomassie et lautre pour faire le transfere.Le problème est que pour les résultats au comassie on voit rien.c'est a dire pas de bande pour notre protéine qui normalement devrait être surexprimé.ET MEME RESULTAt sur le western blot.alors que sur phast gel il ya resultat.le phast gel lui a étè realisé sur nos proteine purifié
    aide moi

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