Inconvénients de la trypsination

[invited4d08314]

Bonjour a tous,
Voilà, mon professeur nous a présenter le cours de la mise en culture des cellules en nappe sous forme de diagramme avec pleins de flèches, en temps normale j'aime beaucoup cette méthode, mais voilà y a une partie du schéma que je n arrive pas a comprendre et c'est : " les inconvénients de la trypsination" :s

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+milieu de culture et sérum + inhibiteur --> centrifug - ---> milieu de culture
--> dilution de la trypsine


Voilà, en gros ça ressemble a ça, s quelqu'un peut m'éclairer



J'ai une autre question concernant les TGF ( Transform' Growth Factors)
Si j'ai bien compris il s'agit de facteurs ayant la capacité de modifier le phénotype de cellules normales, les rendant tumorales, il s'agit des deux types de TGF alpha et béta. ( je me pose la question, est-ce-que le génotype change aussi ?)

d'autre part, le TGF béta à une action anti tumorale (Tumoral Inhibitor Factor)

Ce que je ne comprend pas, c'est comment un même facteur peut avoir le rôle de modifié une cellules normales et la rendre tumorale Et joue également le rôle de facteur anti tumorale ( TGF béta, le alpha n a qu'un seul rôle)

Je me suis dite que ça peut etre du à sa concentration , ou à alors aux facteurs environnant ?



Merci bien d'avance
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[invited4d08314]

Olàà j'aurai du faire prévisualisation du message =)

Pour le schéma: y a deux grande flèches :

La première: (+) milieu de culture et sérum --> dilution de la trypsine ( ça j ai compris )

L'autre flèche: (+) inhibiteur de la trypsine --> centrifugation --> 1à2 lavages--> + milieu de culture (là par contre je n ai rien compris )

Les inhibiteurs de la trypsine c'est nous qui les ajoutant au milieu de culture, alors pourquoi il représente un inconvénient, on a qu a ne pas les mettre =)

[invite6d6b7805]

Bonjour,

Si je comprends bien, c'est pourquoi la trypsine et comment s'en débarrasser ?

Elle sert à détacher les cellules de leur support en digérant la matrice. Seulement elle "attaque " aussi les cellules elles mêmes, créé un stress assez important. Et si tu travailles avec des cultures primaires que tu peux mettre jusqu'à 3h à isoler, mieux vaut aller vite et inactiver rapidement la trypsine. Ceci se fait en ajoutant du milieu de culture contenant du sérum, ou tout simplement du sérum.
Mais il arrive que certaines expériences doivent se faire en absence de sérum, d'où les futurs changements de miieu

[invited4d08314]

Mercii bien =)

[A voir en vidéo sur Futura]