probleme de migration electrophorèse

[invite7651866c]

Bonjour,
J'aurai besoin de votre avis sur une question qui revient souvent dans mes annales de partiels...

"Vous avez réalisé une électrophorèse des protéines sériques et vous obtenez après coloration une migration trop courte et des fractions mal séparées. Quels paramètres allez vous modifier pour améliorer la technique?"

J'ai plusieurs idées de facteurs qu'on pourrait modifier pour modifier une électrophorèse : le pH du tampon, la force ionique, le voltage, l'intensité du courant, la durée de migration.

Mais dans ce cas là, quels sont les facteurs que vous changeriez?

Merci d'avance pour vos réponses.
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[invite853321bf]

Ben là comme ça, je n'en vois qu'un que tu n'as pas cité. Mais bon ça fait longtemps y en surement d'autres.
Maintenant, si tu modifies un à un chacun de ceux que t'as cités, quel en sera l'effet sur la migration d'après toi ?
Il faut avoir ce raisonnement, c'est le but de l'exercice. Et c'est ce genre de démarches qu'on te demandera après

[invite7651866c]

J'ai aussi pensé à la nature du support mais bon dans le cas présent, on peut peut être songer à une solution moins radicale.

Je dirais que . si on augmente le temps de migration , la migration sera plus longue donc ca me parait pas mal.
. je pense que l'on peut augmenter le voltage ou l'intensité du courant
. concernant le pH du tampon, je sais pas trop si on peut le modifier parce que normalement il me semble qu'une électrophorèse des protéines sériques doit se faire à pH 8.6. Et si on le peut, pour déterminer s'il faut l'augmenter ou le diminuer, il me parait nécessaire de connaitre le pHi des protéines, non?
. Concernant la force ionique du tampon, je vois pas trop ce que ca pourrait changer de l'augmenter ou de la diminuer??

Qu'est ce que vous en pensez?

[piwi]

Il manque l'information de savoir si on est en conditions dénaturantes ou pas.

Sinon, on vous dit que la migration est trop courte. L'information est qu'il y a une migration. Donc à prori, on n'a pas à modifier le pH ou la force ionique du tampon.
Le fait que les protéines restent en haut du gel peut être du à deux choses: les protéines n'ont pas eu le temps de migrer et les protéines sont coincées dans le gel trop concentré.

Les protéines n'ont pas eu le temps de migrer:
1. J'augmente le temps de migration.
2. J'augmente l'intensité du courant. Contrêtement, cette option est risquée parce que si le courant devient trop intense, il va y avoir un fort échauffement qui va dégrader le gel et nuire à la qualité de la migration.

Le maillage est trop dense:
1. Je refais un gel moins concentré en acrylamide.

Cordialement,
piwi

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite7651866c]

Merci beaucoup d'avoir pris le temps de me repondre.

Bonne soirée