bonjour,
Je travaille sur des oligodendrocytes de souris (cellules qui ont un rôle essentiel dans la formation de myéline au niveau du système nerveux central). j'ai extrait les ARNm pour réaliser des qPCR. Se pose le problème de choisir un bon gène de référence. Dans la littérature, j'ai trouvé que certains auteurs utilisent la cyclophiline. Quelqu'un a-t-il déjà utilisé ce gène comme gène de référence?
Merci d'avance
Bonjour,
En général, le standard interne le plus utilisé en PCR est le gène codant pour la glycéraldéhyde 3 phosphate déshydrogénase (GAdPH). Il a la particularité d'être exprimé de façon linéaire dans la quasi totalité des cellules.
j'utilise la cycliphilline, c'est pas mal. J'ai rarement observé de variation (sauf traitement lourd genre adénovirus a haut titre, etc...) et je pense que c'est une bonne référence.
Un autre très utilisé (seulement si tu travailles sur ARN totaux et pas m uniquement) est le 18S mais le défaut et que sa forte abondance peut entrainer des biais.
En fait d'habitude j'utilise effectivement la GAPDH mais en ce moment je travaille sur le métabolisme énergétique donc ce gène de référence n'est pas très approprié.
Merci Flyingbike pour ta réponse, je vais essayé la cyclophilline.
