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TP de PCR preparation tampon de lyse



  1. #1
    tichou972

    Red face TP de PCR preparation tampon de lyse

    Bonjour , j'ai un TP a preparer avec la technique de PCR
    en premier lieu nous devons preparer le tampon de lyse mais je n'y arrive pas.

    on a :
    TRIS 1M, pH 7,5
    EDTA 0.5M
    Proteinase K (10 mg/ml)
    SDS 20%

    et on veut preparer 5 ml de tampon de lyse a concentration finale (TRIS 10mM ; EDTA 1mM + SDS 0.5% + proteinase K 100µg/ml)

    il manque une donnée non? je comprends que le volume totale du tampon doit faire 5ml, mais comment faire les differentes dilutions de chaque solutions si on a pas le volume final de chaque d'elles?
    je me trompe?

    merci pour votre aide

    -----


  2. #2
    Flyingbike

    Re : TP de PCR preparation tampon de lyse

    c''est très simple je te donne un exemple :

    ton TRIS est à 1M
    La concentration souhaitée est 10mM, soit 100 fois moins. ok ?

    Tu veux préparer 5mL de solution, il faut donc mettre 5/100 soit 50µL de tris dans la solution.

    Il suffit de faire pareil avec les autres constituants, et de compléter avec de l'eau.

  3. #3
    tichou972

    Re : TP de PCR preparation tampon de lyse

    Salut,
    merci beaucoup de ta reponse
    donc si j'ai bien compris et suivi ton raisonnement
    pour TRIS : 50µl
    pour EDTA : 10µl
    pour Proteinase K : 50µL

    mais pour le SDS je suis pas sur vu que c'est de la poudre
    j'ai trouvé 0.125g

    je sais que le SDS 20% correspond a 20g pour 100ml idem pour le SDS 0.5%

  4. #4
    Flyingbike

    Re : TP de PCR preparation tampon de lyse

    Non, SDS 20% est une solution de SDS en poudre dans de l'eau. Il faut faire le meme raisonnement, 20/0,5 = 40 donc 125µL.

    Si tu avais de la poudre, il faudrait peser 5mL*0,5/100 soit 25mg

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