TP de PCR preparation tampon de lyse

[invite4de0a5d0]

Bonjour , j'ai un TP a preparer avec la technique de PCR
en premier lieu nous devons preparer le tampon de lyse mais je n'y arrive pas.

on a :
TRIS 1M, pH 7,5
EDTA 0.5M
Proteinase K (10 mg/ml)
SDS 20%

et on veut preparer 5 ml de tampon de lyse a concentration finale (TRIS 10mM ; EDTA 1mM + SDS 0.5% + proteinase K 100µg/ml)

il manque une donnée non? je comprends que le volume totale du tampon doit faire 5ml, mais comment faire les differentes dilutions de chaque solutions si on a pas le volume final de chaque d'elles?
je me trompe?

merci pour votre aide
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[Flyingbike]

c''est très simple je te donne un exemple :

ton TRIS est à 1M
La concentration souhaitée est 10mM, soit 100 fois moins. ok ?

Tu veux préparer 5mL de solution, il faut donc mettre 5/100 soit 50µL de tris dans la solution.

Il suffit de faire pareil avec les autres constituants, et de compléter avec de l'eau.

[invite4de0a5d0]

Salut,
merci beaucoup de ta reponse
donc si j'ai bien compris et suivi ton raisonnement
pour TRIS : 50µl
pour EDTA : 10µl
pour Proteinase K : 50µL

mais pour le SDS je suis pas sur vu que c'est de la poudre
j'ai trouvé 0.125g

je sais que le SDS 20% correspond a 20g pour 100ml idem pour le SDS 0.5%

[Flyingbike]

Non, SDS 20% est une solution de SDS en poudre dans de l'eau. Il faut faire le meme raisonnement, 20/0,5 = 40 donc 125µL.

Si tu avais de la poudre, il faudrait peser 5mL*0,5/100 soit 25mg

[A voir en vidéo sur Futura]