Bonjour,
En fait j'ai un petit soucis, je ne comprend pas le rôle indispensable d'un promoteur pour un gène, en particulier lorsque l'on insere un gene d'interet dans un plasmide vecteur.
Est-ce que l'expression de ce gene depend du promoteur? (en relation avec le declenchement de sa replication..?)
Et pouvez vous m'expliquer la difference entre les differents promoteurs?
Merci d'avance pour vos reponses
Salut,
je pense qu'il y a un petit souci de section mais je mise sur une téléportation du topic.
Effectivement l'expression d'un gène, même dans un plasmide, dépend de son promoteur.
Ensuite on parle de transcription d'un gène, pas de réplication.
Le promoteur sert à recruter des protéines nécessaire à l'initiation de la transcription du gène qu'il régule.
Lorsqu'on veut exprimer un gène d'intérêt via un plasmide on utilise des promoteurs dit "fort" qui on un potentiel transcriptionnel important pour que le gène soit fortement exprimé.
merci pour ta reponse et rectification
Mais est ce que chaque gene a un promoteur specifique (je parle toujours dans le cas d'insertion de gene dans un plasmide), ou on peut utiliser n'importe quel promoteur du moment qu'il est "fort"?
Généralement dans les plasmides que tu utilises pour faire tes clonages le promoteur est "de base" sur ton plasmide,il est compris de série on peut dire. Il servira pour le gène que tu insères dans ton multi site de clonage.
Envoyé par fativeto
il faut surtout faire attention qu'il soit spécifique de là ou tu vas faire exprimé ton plasmide, car un promoteur bactérien est différents d'un promoteur eucaryote ou viral...
par exemple si tu veux mettre un gène humain dans un plasmide et faire exprimer ce plasmide dans une bactérie tu dois avoir un promoteur bactérien, sinon la machinerie cellulaire ne le reconnaitra pas
mmmmm
en fait jinsere un gene viral, dans un plasmide --> selection du "bon" plasmide dans des cellules bacteriennes (a laide de la selection AB), mais l'expression final du gene que je recherche doit se faire dans des cellules animales
--> ce qui veut dire que mon promoteur doit etre un promoteur eucaryote?
pour ta production je pense que soit il te faut un promoteur euca soit tu insères ton gène derrière un promoteur par recombinaison homologue...
(si je me trompe n'hésitez pas à me reprendre les gens
bein en fait cest que mon gene est bien insere derriere un promoteur et il se retrouve apres par recombinaison homologue dans le genome viral,
cest ce que tu veux dire?
comment ça il se retrouve apres dans le génome viral???
comme on dit je suis passe du coq a l ane hhh c'est parce que tu as parle de recombinaison homologue.
En fait pck mon premier gene en question X est flanque par une partie d'un autre gene Y, ce gene Y ne me servira que pour realiser une recombinaison homologue, et pour insere X.
nb: transfection, infection et recombinaison auront lieu dans des cellules animales
dc bien que jai une petite etape de selection dans des cellules bacteriennes (liee au fait que mon plasmide a une resistance AB), mon promoteur doit etre eucaryote?
jusque là je suis, ça c'est pour insérer ton gène dans ton plasmide
quelle étape tu fais chez les bact? ton insertion de gène et ta sélection?
tu repasses comment en cellules animales???
oui moi je pense que si tu produits en cellules animales c'est un promoteur animal qu'il te faut...
mais cela ne reste que mon avis, je ne suis pas une vrai spécialiste dans ce domaine.... ^^
--Etape bacterienne = etape de transformation (par electroporation)
J' integre dans les bact mon plasmide dans lequel j'aurais au prealable insere mon gene X (grace aux enzymes de restriction)
Par pression de selection AB sur les bacteries, je vais pouvoir selectionner uniquement les colonies bact qui ont integrer mon plasmide (qui a un gene re resistance a la selection).
--Etape cellules animales:
Apres avoir extrait mes plasmides (qui contiennent X) je les fais rentrer dans les cellules animales par transfection. et je pense que c'est a ce moment la que le promoteur entre en action????
Aaaaaaaa ce promoteur
nb: desolee jai un soucis daccent avec mon clavier
oui ton promoteur ne joue un rôle que kan il y a transcription. tu dois choisir un promoteur spécifique de tes cellules animales vu que c'est dans ces cellules là que tu veux que ton gène soit transcrit puis traduit...
okiiii merci
