Bonjour à tous, moi et mon équipe de classe devons réaliser un protocole ELISA indirect à partir d'un article en anglais que le prof nous a fourni et la matière sur cette technique n'a pas encore été vu en classe. Je comprends bien le principe de base du test ELISA mais mon questionnement est davantage d'aspect pratique.....
Premièrement, j'ajoute que nous avons 2 types d'anticorps, « Goat profilin polyclonal antibody » et « rabbit anti-goat IgG alkaline phosphatase conjugated », le tampon de lavage est du PBST et celui pour sceller les puits (to block?) est du 5% BSA dans du TBST et le substrat du pNPP. Si j'ai bien compris, le but est de doser de la profiline (correspondant à l'antigène ici) par l'intermédiaire d'un des Ac.
À quoi cela sert-il de trouver une concentration optimal pour les anticorps? Serait-ce pour l'intervalle d'efficacité de la lecture d'absorbance?
Comment procède-t-on pour réaliser une courbe standard? Utilise-t-on une concentration connue de profiline avec différentes dilutions d'anticorps?
Et pour le test en général, faudra-t-il préparer un puits sur la microplaque pour chaque concentration de chaque Ac? À ce moment, comment savoir laquelle des valeurs sera la bonne???
Bon... c'est peut-être beaucoup de questions, mais ma journée de recherche à la bibliothèque n'a pas porter fruits...
Merci beaucoup à ceux qui m'aideront à m'orienter dans cette nouvelle technique pour moi!![]()
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