Bonjour,
Je travail sur le transfert de résistance et j'ai un soucis...
Je vous résume un peu le problème.
Je cherche à savoir si gène de résistance à un aminoglycoside est porté par le chromosome ou un plasmide. Dans la littérature, il semble que les 2 soit possible.
Si je prends une population de souches résistante, j'en ai à peut près la moitié qui présentent un plasmide a l'électrophorèse (après extraction avec un kit traditionnel). Et je veux savoir si la souche est capable de transférer son plasmide à une souche sensible et la rendre résistante.
Je fais mon liquid mating, l'obtient des transconjugants résistants mais je ne retrouve pas forcément le plasmide...! Premier problème. A ma connaissance, une bactérie ne peut transférer sa résistance que par le biais d'un plasmide, non? Alors comment mes souches deviennent résistantes? Estce qu'elle peuvent intégrer le plasmide aussi rapidement?
Ensuite, j'essaye de transformer une souche compétente avec un des plasmide que j'ai retrouvé dans les transconjugant et je n'ai pas de colonies sur mes géloses sélectives!
Je me dit soit le plasmide n'à rien à voir avec la résistance (mais j'en revient au 1er problème, comment mon transconjugant est devenu résistant), soit le plasmide n'est pas exprimer correctement par ma souche, soit il est létale. Le problème ici c'est que je ne sait pas comment aller plus loin?
Du coup, j'aimerai savoir s'il est possible de séquencer un plasmide totalement inconnu (je n'peux pas choisir d'amorce vu qu eje ne connais aucune séquence). Peut-être que quelqu'un à déjà réussit à faire ça...
Voilà, je sais pas si vous y avez compris quelque chose ^^' Je m'exprime pas toujours très clairement =/
Mais bon, si quelqu'un à été dans ce genre de situation et à réussit à s'en sortir, je suis toute ouïe!
Cordialement
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