Bonjour tout le monde.
Cela faisant un moment que je ne fais plus de biochimie, j'aimerais que vous m'aidiez pour un test d'activité enzymatique.
Je suis la formation de TNB pendant 240 secondes (à 412 nm), formé par mon enzyme en dégradant le DTNB.
Ainsi, après ces 4 minutes, j'obtiens une droite (donc on est en Vi), et je calcule la pente (en sec -1).
Comment puis déterminer l'activité enzymatique svp?
Merci beaucoup
Connais-tu le coefficient d'extinction molaire du TNB? C'est grâce à lui que tu pourras déterminer l'activité enzymatique.
Oui: 13 600 M-1.cm-1
Et donc svp?
re-
Cela te permet de convertir les absorbances en concentration molaire, donc tu convertis ton coefficient directeur en M/seconde en le divisant par le coefficient d'extinction molaire. Puis tu le multiplies par le volume du milieu réactionnel pour avoir des mol/seconde, et multiplier par 60 si tu veux l'exprimer en minutes.
Le volume réactionnel, donc sans le volume d'enzyme rajoutée... Ok merci.
Et pour kcat svp? on divise par la quantité d'enzyme utilisée (en mole) je suppose
