Comment éliminer un marquage immunocytochimique?

[invite4b51c9d6]

Bonjour à tous,

Je suis sur un problème de recherche et je ne trouve pas de solution, si vous avez des idées je suis preneur!
J'ai des cellules fixé et marquée avec des anticorps primaire souris/chèvre et secondaire fluo (488 et 555) pour deux marqueurs membranaires. Je dois les traiter de manière à dénaturer leur ADN (j'ai un protocole impliquant triton et HCl à 1N) pour en marquer des modifications. Evidement mon anticorps ciblant les modifications est murin, donc je dois trouver une technique pour enlever les anticorps fixés à la membrane.

Pour l'instant j'ai essayé :
- des traitements à la trypsine, différentes concentration/temps d'action -> ne marche pas.
- Mon protocole de dénaturation de l'ADN avec 1,5N de HCl -> pas top (trop de marquage reste)

Voilà j'ai pas foule d'idées (on m'a proposé des traitements UV ou micro-onde, mais pour garder l'ADN un peu intact y'a mieux^^), hésitez pas à faire des propositions!
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[noir_ecaille]

Une idée comme ça...

Avez-vous essayer de dénaturer les anticorps à HCl avant d'ajouter de la pepsine, puis de rééquilibrer le pH et utiliser la trypsine ?

[invite4b51c9d6]

> noir_ecaille : je n'ai pas pens à utiliser de la pepsine, ça commencera à faire pas mal de traitement mais ça pourrait parcher, je vais y réfléchir. Merci!

[invite28f6e6c6]

de la Glycine 2M acide.

[A voir en vidéo sur Futura]