Bonsoir
je cherche une solution pour préparer un buffy coat à partir d'un échantillon de sang. Mon problème réside plus particulièrement dans le choix des paramètres à utiliser lors de la centrifugation.
la centrifugeuse que j'ai à disposition est la "Universal 320R"
MERCI D'AVANCE !!!!
Salut
Quand je veux récupérer le buffy coat j'utilise la même centri que pour récupérer le plasma c'est à dire 20 minutes à 800g.
merci,
c'est ce que j'ai fait, mais je n'obtiens pas de bonnes concentrations au nanodrop (1000) : elles doivent être comprises entre 125 et 250ng/microL or j'obtiens en général 60, 90............. (mais la qualité est bonne : le rapport DO260/DO280 est toujours compris entre 1.7 et 1.9)
avez-vous un petit conseil pour augmenter la concentration d'ADN ?
j'ai entendu parler qu'ajouter du PBS avant l’extraction pouvait marcher, mais je n'en suis pas sûr (je vais tout de même essayer dès que je m'en procurerai)
merci
Tu utilises quelle technique pour ton extraction d'ADN?
J'utilise l'extracteur QIAcube
Je ne connais pas particulièrement ce système mais il se peux que tu satures ta colonne et dans ce cas là, même si tu mets plus de cellules tu n'auras pas plus d'ADN. Il faut que tu verifies les spécifications de ton kit : ton problème vient sans doute que de là.
Bonjour,
Question, tu préparer un buffy coat donc des cellules mononuclées ou tu veux préparer de l'ADN à partir de cellules mononuclées ? C'est 2 étapes différentes...
Je prépare des buffy coat dans le but d'en extraire l'ADN.
Tu as besoin d'aide pour la préparation du buffy ou de la prep d'ADN ?
J'avais besoin d'aide pour la préparation d'un buffy dans le bur d'obtenir une bonne concentration d'ADN après extraction (comprise entre 25 et 50 microgrammes/200microlittres, ce qui correspond à 125-250nanogrammes/microlittres).
Mais laissez tomber, on m'a donné une solution : lavages au tampon AE QIAgen, repos dans la glace 15min, et ajout de PBS. Ça marche !
