Bonjour,
Dans un article, il y a une technique de GST-pulldown avec une protéine étiquetée GST et une autre étiquetée HA.
En gros, je crois avoir compris que c'est pour montrer leur intéraction mais je ne connais pas le principe de la technique...
Est-ce que quelqu'un pourrait me l'expliquer ?
Merci !!
en gros l'étiquette GST permet de purifier les protéines étiquetées en utilisant des billes sur lesquelles se fixent l'étiquette. Apres avoir récupéré tes protéines, tu peux les déposer sur un gel d'acrylamide et faire un western blot avec par exemple un anticorps anti-HA. Du coup si tu as un signal, c'est que ta protéine HA a été purifiée en même temps que la protéine GST et qu'il y avait interaction.
Ok merci beaucoup ! En gros c'est de la coimmunoprécipitation quoi ?
Mais alors je me permets de te joindre l'image de l'article... Je n'arrive pas à décrypter dans quel sens ils font quoi, qu'est-ce qu'ils ont purifié puis quels sont les anticorps utilisés... Ni pourquoi il y a utilisation de Ponceau...
Si tu peux me donner un coup de main ce serait adorable !
file:///Users/clement/Desktop/pulldown.tiff
Re : GST pulldown
bonsoir ,j'aimerais savoir si une étiquette MYC marche exactement de la même manière que la l'étiquette GST et qu'elle est la différence si vous la connaissez
merci
Les deux méthodes ont leurs avantages et inconvéninents : le tag myc est très petit (environ 1 kDa), par contre son utilisation est couteuse car il doit être reconnu par un anticorps. A l'inverse, le tag GST est une "vraie" protéine d'environ 26 kDa, dimérique (ça peut avoir des conséquences sur la cible), mais bien plus simple et moins couteuse a utiliser (l'élution se fait par le glutathion). Le myc peut etre utilisé en N- et en C-ter, la GST ne marche qu'en N-ter.
Merci beaucoup!
