Bonjour,
je suis actuellement en stage de M1 qui m'a conduit à effectuer un marquage FACS pour détecter la présence d'un CMH de classe I produit à partir d'un transgène (transfection par lipofectamine)
Mon problème se situe au niveau des résultats obtenus. J'utilise un anticorps couplé à du PE et les cellules sont perméabilisée à la saponine car le CMH de classe I que je souhaite détécté à été rendu soluble. Je commence donc par passer mon témoin négatif (cellules perméabilisées non transfectées + Ac-PE), j'obtiens un pic normal. Et quand je passe mes cellules transfectées, j'obtiens un pic positif et un négatif, cependant, ce dernier s'est légèrement décalé sur la droite comparé au témoin négatif, une sorte de shift. Impossible de comprendre pourquoi.
Je précise que rien n'a été changé entre les deux essais, ni les paramètres, ni le gate, rien. Si une âme charitable pouvait m'apporter ses lumières, ce serait génial![]()
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