élèctrophorèse (ADN)

[invite861bf631]

Bonjour, durant un tp de biomol, j'ai fait une élèctrophorèse sur gel d'agarose de fragments d'adn. Seulement j'ai du mal à interpreter les résultats, je m'explique:
- On a mis dans un puit un marqueur donc là dessus j'ai bien compris le principe.
- dans trois autres puits on a mis de l'adn fragmenté sous UV à des temps différents ( T0, T1, T2)
- dans un autre; de l'adn digéré par une proteine

Mon problème est que je n'arrive pas à expliquer pourquoi à T0 j'ai une barre près du puits et qu'à T2 il n'y a plus rien près du puits.
(Sachant que pour le puits contenant l'adn digéré par une proteine
il n'y plus de trace vers le puits la migration est bien nette.)

S'il y a encore une trace près de puits celà veut-il dire que l'adn n'est pas totalement dissocié??

Je vous remercie d'avance pour votre aide.
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[invite75e918c6]

A T0, il est normal de voir plus d'ADN qu'a T1 ou T2 puisqu'il n'y a pas eu d'action des UV (a moins que T0 a une valeur temporelle).

Donc, si tu n'observes pas de bande dans un puits c'est que le poids moléculaire de l'ADN fragmenté n'est pas dans la fourchette de taille observable par le gel d'agarose calibré (autrement dit, ton ADN est tellement petit qu'il a pu passer a travers ce maille et que lors de la migration, il a carrément quitter le gel en migrant vers une électrode)

[invite861bf631]

Merci de votre réponse. (T0 est bien T=0min)
Donc j'ai compris pour la première partie.

Par contre, j'ai du mal m'exprimer, ce que je n'arrive pas à expliquer c'est pourquoi à T0 on voit une migration avec nottament une barre près du puits, à T1 la migration est de même longueur sauf que la barre près du puits apparait moins nettement, et à T2 la migration est bien visible aussi mais il n'y a plus de barre tout près du puits.

[Flyingbike]

la "barre" correspond a l'ADN entier. j'imagine que c'est un plasmide, donc l'ADN intact est constitué de plusieurs molécules de la même taille. Tout migre donc a la meme vitesse, d'ou la barre.

Ensuite le traitement aux UV a pour conséquence de fragmenter ces molécules d'ADN en fragments plus petits, de façon a ce que plus on expose aux UV, plus on fragmente l'ADN. Du coup a T1, une partie de l'ADN de départ est fragmenté, donc moins de signal, a T2, on a tout cassé, donc plus de barre mais un ensemble de fragments de petite taille qui doit ressembler à une trainée.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite75e918c6]

Oui c'est bien ça. J'avais du mal à saisir mais c'est une question de concentration de ton ADN de départ.

Les fragments d'ADN ne "restent" pas sur le gel d'agarose d'où le fait que tu n'as pas plusieurs barre (sinon ça voudrait dire que les délétions dù aux UV donne des molécules d'ADN de tailles différentes) mais bien qu'une seul qui correspond à ton ADN qui est resté intacte (n'oublie pas que tu n'as pas qu'une seule molécule d'ADN dans un puit mais plusieurs)

Donc ça redit et complémente un peu la réponse de FlyingBike