problème dosage au Qubit Invitrogen

[inviteffc39746]

Bonjour à tous,

Je vous sollicite pour un problème de dosage.
Par 2 fois le Qubit m'a donné une concentration moins importante qu'au nanodrop.
1 exemple =>130ng/µl au nanodrop contre 40ng/µl au qubit
Sachant que j'ai mis 5µl de mon échantillon dans le mélange pour le qubit
Ne pouvant pas recommencer le dosage pour voir si c'est une simple erreur de pipettage (que je doute fortement) je m'en remets à vous au cas où quelqu'un est déjà rencontré ce genre de problème.

Petite précision : mes 2 échantillons n'étant pas de même nature (1 ADN bactérien et 1 Humain) je ne pense pas que ça vienne de là mais puisque je fais de la prestation je ne sais pas par quoi ces échantillons sont passés avant d'atterrir dans mes mains

Merci d'avance pour vos réponses
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[invite02cefc91]

Bonsoir,

C'est normal que tu obtiennes une concentration plus faible qu'avec le nanodrop.
La technique Qubit est beaucoup plus précise que le nanodrop. Pour ma part, j'utilise le ribogreen (ARN) et picogreen (ADN) (même principe que Qubit) et j'ai toujours des concentrations inférieures comparées au nanodrop.

Moi ca ne me choque pas

[invitec9f0f895]

Salut

Je confirme ce que dit malesore, c'est classique. Le nanodrop surévalue quasiment toujours la concentration, car il peut y avoir beaucoup d'autre chose qui absorbent à 260! (proteines, solvants etc...)

Si tu dois te fier a quelquechose ne te fie pas au nanodrop

YOyo

[inviteffc39746]

Bonjour et Merci à vous 2 pour vos réponses.

Pour te répondre Yoyo, je ne pense pas que ça vienne d'un problème de pureté dans mon cas puisque le nanodrop me donne des rapports de Do assez bon. Et même s'il y avait des traces de protéines je ne pense pas que ça explique une telle différence. 3 fois moins je trouve que ça fait beaucoup même si le Qubit est plus précis.
Je me demandais donc si le problème pouvait venir d'une dilution trop importante (5µl de mon échantillon dans 195µl de working solution) pour que le Qubit dose correctement. Peut-être que du coup il n'arrive pas bien à calculer par rapport aux standards ?

Merci encore

[A voir en vidéo sur Futura]

[gorben]

Le nanodrop dose l'ADN et l'ARN. Le qubit c'est juste de l'ADN (ou ARN).
C'est juste que tes echantillons sont contamines par de l'ARN.

[inviteffc39746]

Certes c'est une hypothèse à laquelle j'avais pensé mais cela signifierai que nos clients ont extrait plus d'ARN que d'ADN. Mais bon c'est possible après tout, on a déjà vu pire ici (pas d'ADN du tout par exemple) !!!

Merci à tous pour vos réponses