Détergent le plus adéquat pour acellularisation

[invitecd2b33a6]

Bonsoir!

Dans le cadre d'un projet, je vais devoir effectuer une décellularisation ou acellularisation. Je me suis renseigné sur le sujet et j'ai cru comprendre que les deux méthodes les plus utilisées étaient via du :

-Detergent 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammoni o]-1-propanesulfonate (CHAPS)
-Du SDS 1% ou 0.5% suivant les protocoles.

(avec bien sur d'autre étapes de lavages, DNAses etc ...)

Après avoir chercher sur le forum je n'ai pas trouvé de post parlant du protocole.

Certains auraient-ils déjà effectués ce type de protocole svp? et si oui quelles sont les cellules qui "supportent" le mieux cette procédure svp? ( le but étant au final d'avoir une matrice extracellulaire la moins dégradée possible )

Merci d'avance!

Bonne soirée
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[inviteae6c05c4]

Bonjour,

Pour cela, j'utilise une solution maison d'ammoniac : NH4OH 20 mM, 0,01% Triton. C'est très doux et très rapide. Par contre, les cellules elles ne supportent pas du tout le traitement (c'est le but, non ?). Mais la matrice est relativement bien conservée.

[invitecd2b33a6]

Salut, merci pour ta réponse!

NH4OH 20 mM, 0,01% Triton. C'est très doux et très rapide.

Cool, c'est ce que je recherche, et oui les cellules n'y résistent pas c'est le but


D'autres ont des infos sur les détergents type SDS ou CHAPS svp? Car dans les travaux que j'ai trouvé ceux là sont utilisés, et je me demande s'ils n'ont pas de meilleurs résultats pour la conservation de la matrice.

Merci d'avance.

[inviteae6c05c4]

Car dans les travaux que j'ai trouvé ceux là sont utilisés, et je me demande s'ils n'ont pas de meilleurs résultats pour la conservation de la matrice.

L'ammoniac c'est également publié et bien documenté. On retrouve les protéines par western blot par la suite, c'est une des preuves que la matrice est bien conservée.

Concernant les détergents comme le SDS, franchement je ne m'y aventurerais pas. Cela va dénaturer toutes les protéines et donc déstructurer ta matrice.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitecd2b33a6]

salut

L'ammoniac c'est également publié et bien documenté. On retrouve les protéines par western blot par la suite, c'est une des preuves que la matrice est bien conservée.

Génial, merci!

Par contre tu préconises NH4OH 20 mM, 0,01% Triton, mais quel est le temps d'exposition?
Utilises tu aussi du pbs ( et si oui cb de temps ), et une DNAse?
Enfin, avec l'ammoniac, les microtubules et filament inter sont-ils dégradés aussi ou faut-il un traitement par drogue stp?

Merci encore!