Bonjour,
J'ai testé une molécule sur les cellules en apoptose et en nécrose. Elle marque les deux mort cellulaires. On m'a dit que le fait qu'elle ne soit pas spécifique de l'apoptose était un inconvénient. Mais est-il possible qu'une molécule soit spécifique de l'apoptose et donc qu'elle ne marque pas les cellules nécrotiques? Si oui, comment est-ce possible?
Merci pour vos réponses !
Bonne soirée, Marie
Bonjour et bienvenue sur Futura Sciences,
Un marquage oui, mais avec quelle technique : FACS, microscopie à fluo,...?
Par FACS ou microscopie à fluorescence. En fait, j'aimerais savoir si c'est possible d'avoir une molécule qui cible l'apoptose mais pas la nécrose?Envoyé par LXR
Le marquage Annexin V en FACS cible l'apotpose. Le problème est qu'après l'apoptose il y a ce qu'on appelle la nécrose post-apoptotique, mais qui se différencie tout de même de la nécrose simple qui elle n'est pas marquée par l'annexin V. On fait toujours un double marquage Annexin V / PI (iodure de propidium), ainsi on peut discriminer 3 types de cellules : AnnV - / PI - (cellules normales), AnnV + / PI - (cellules apoptotiques), AnnV + / PI + (cellules en nécrose post-apoptotique), AnnV - / PI + (cellules en nécrose).
En IF, tu peux mettre en évidence l'apoptose en faisant un marquage anti-cytochrome C (point focaux sur cellule normale, marquage diffus sur tout le cytoplasme sur cellule en apoptose).
Merci mais j'ai induit la nécrose sur des cellules en présence de l'annexine V-FITC et elle marquait les cellules nécrotiques. Ce que je ne comprends pas c'est comment une molécule peut-elle cibler les cellules apoptotiques et ne pas savoir cibler les nécrotiques? Car puisque lors de la nécrose, la membrane est perméabilisée, donc les molécules détectant l'apoptose peuvent également atteindre leur cible.
Ben justement, c'est pour ça qu'on fait un double marquage. L'annexine-5 va marquer plus ou moins toutes les cellules mortes, et le deuxième marquage à l'iodure de propidium ne va marquer que les cellules en nécrose. Vu que l'IP est un intercalaire, il ne pourra marquer que les nécrosées, puisque l'ADN des cellules apoptotiques est dégradé.
Non, justement l'exposition des Phosphatidyl-sérines c'est spécifique des cellules apoptotique. Donc l'annexine marque les cellules apostoliques.
Oui mais lors de la nécrose, l'annexine peut atteindre les phosphatidylsérine sur le feuillet interne puisque la membrane est perméabilisée. Je sais que pour l'annexine V-FITC, il faut utiliser un autre marqueur comme l'IP pour distinguer l'apoptose de la nécrose. Mais justement, apparemment, on recherche des marqueurs spécifiques uniquement à l'apoptose, donc ne ciblant pas les cellules nécrotiques.
Bonjour,
Je travaille sur une forme de mort cellulaire non apoptotique et je confirme que pour distinguer les cellules apoptotiques, des cellules nécrotiques, je fait un marquage annexin V/PI.
Sinon, tu peut aussi détecter des formes activés de Caspases par exemple en FACS...
