Séquence Kozak

[invite9b2a5846]

Bonjour

Je compte insérer une séquence tag (3xFlag) devant la séquence codant pour une protéine qui débute par accatg... donc une séquence Kozak avant l'atg.
Je vais donc en mettre une aussi devant la séquence codant pour le tag.Ma question: est-ce qu'il faut supprimer la séquence Kozak devant l'atg de la protéine pour ne plus avoir que celui en tête du tag ou cela n'a-t-il pas d'importance?

acc atg ....3xFlag ..... acc atg ...protéine
ou
acc atg ....3xFlag ..... atg ...protéine.

Que peut-il se passer si les deux séquences Kozak sont présentes
merci
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[invite0d608256]

Bonjour.
Moi je ferais la seconde solution.
Moins tu ajout de chose entre ton tag et la protéine mieux c'est.

[invite9b2a5846]

merci de ta réponse mais qu'est-ce qu'il se passe quand on a une séquence Kozak précédant chaque atg: expression?? fusion??

j'ai reçu des plasmides contenant des protéines couplées en N term à une protéine fluorescente. Dans certains plasmides il y a deux séquences kozak et dans d'autres non

[invite0d608256]

Ta sequence sert a l initiation de la traduction. En theorie tu dois avoir ces sequences comprises dans les promoteur au sein de tes plasmides. Certaines personnes preferent en rajouter au cas ou..

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite9b2a5846]

oui mais ça ne répond pas à ma question.
D'un point de vue moléculaire, que se passe-t-il quand on une séquence Kozak devant chaque atg? quid de la protéine fusion? du tag?
visiblement d'après l'expérience de mon fournisseur de protéines fusion fluorescentes, ça ne pose aucun problème

[invitee170a0e7]

je me pose les mêmes questions (cf le topic d'en dessous ^^). Sachant que cette séquence favorise l'initiation de la traduction...
Je penche plutôt du côté que c'est celui proche du tag qui prime (car généralement le 1er )

[invite0d608256]

En théorie si on met une séquence avant et une séquence après le tag (avant la protéine) il est possible que l'initiation de la traduction commence avant le tag (s'il a bien un ATG...) et aussi avant la protéine (après le tag).
Tu aurais ainsi des protéines fusionnées et des protéines natives.

Dans les fait le premier est sûrement plus efficace car plus près des séquences promotrice de ton plasmide.

Pour moi la seconde séquence kozak n'est pas utile, ils ont surement la flemme de refaire la construction.