Dosage des macromolécules biochimiques

[bz]

Bonjour,

J'ai quelques questions concernant le dosage des macromolécules biochimiques:

-Pour le dosage d'acide nucléique: .Pourquoi le rapport D0260/DO280 est un indicateur de la pureté de l'échantillon?
.Pourquoi si ce rapport est < à 1,7 la solution d'acide nucléique est surement contaminé par des protéines et quand il est de 1,8 à 2, cette solution est pur?


-Qu'est-ce-que exactement le test Bradford (pour le dosage des protéines) et le test au réactif glucose RTU (pour le dosage des glucides)?

Merci pour vos explications.

Message déplacé vers le forum biologie. Pour la modération Shaddock91
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[Guillaume69]

Ttitre non explicite changé

[bz]

C'est le dosage des macromolécules biochimiques: Acides nucléiques, protéines et glucides.

[Guillaume69]

Le titre était "biochimie: dosage des macromolécules", donc on comprend (bien mieux que "biochimie", le titre original).
Mais je veux bien changer une deuxième (et dernière fois).

Pour la réponse à tes questions:

Pour la première, il s'agit tout simplement du fait que les acides nucléiques et les protéines ont des propriétés d'absorption différentes.
http://en.wikipedia.org/wiki/Nucleic...#Sample_purity
On y lit que les protéines absorbent de la lumière à 280nm, mais que ce n'est pas le cas pour les AN. Ainsi, si le rapport est affecté, c'est qu'on a une forte contamination par des protéines.
Pour la valeur des rapports, on doit pouvoir les retrouver de manière théorique, connaissant les spectres d'absorption des AN et des protéines, et en écrivant que:
A260(tot) = x.A260(prot) + y.A260(DNA)
A280(tot) = x.A280(prot) + y.A280(DNA)
Avec x et y fixé.
Sinon, de manière expérimentale, il suffit de préparer des solutions d'ADN + protéines en proportion variable et de mesurer en spectro ce que ça donne.

Pour ta deuxième question: http://fr.wikipedia.org/wiki/M%C3%A9thode_de_Bradford

Pour le dosage RTU, je n'en n'ai jamais entendu parlé.

[A voir en vidéo sur Futura]

[bz]

Désolé,
Merci pour votre aide, mais je n'ai toujours pas compris la réponse à la 1ère question.
D'où viennent les chiffres 260 et 280?
(Je sais que les bases azotés absorbent à 260 nm dû à la résonance des doubles liaisons).
Pourquoi c'est DO260 en numérateur et l'autre en dénominateur?
D'où viennent les chiffres 1,8;2 et 1,7?
Pourquoi si le rapport est de 1,8 à 2, la solution est pur et quand il est de 1,7, la solution est contaminé par des protéines?

Merci pour vos explications.

[kamor]

260 est le max d'absorbance des acides nucléiques, donc on utilise cette valeur pour les mesurer. 280 car certaines protéines (ainsi que certains solvants) absorbent à cette longueur d'onde

Par contre je voudrais revenir sur

On y lit que les protéines absorbent de la lumière à 280nm, mais que ce n'est pas le cas pour les AN.

c'est partiellement faux, les absorbances ne sont pas des pics mais plutôt des courbes (). Le max d'absorbance est à 260 nm mais les acides nucléiques absorbent aussi aux alentours de cette valeur. Et c'est la même chose pour les protéines. C'est pour cela que on n'a jamais 0 à 280 nm, même si les acides nucléiques sont extrêmement purs.

Et ceci permet d'expliquer pour 260/280. Si c'est pur, l'A260nm doit être supérieur à A280nm, et il a été démontré expérimentalement que c'était entre 1.7 et 2 dans ces conditions.

P.S. = la prochaine fois, lisez les liens qu'on vous envoie, vous aurez plus vite les réponses

For pure DNA, A260/280 is ~1.8 and for pure RNA A260/280 is ~2.

since proteins (in particular, the aromatic amino acids) absorb light at 280nm.

[bz]

Bonjour,

Merci pour vos réponses.
C'est maintenant plus clair.
Bonne journée.