Obtention d'anticorps

[invite82dc8b02]

Bonjour,
Je ne fais pas la différence entre les anticorps polyclonaux et monoclonaux, et la façon dont on les obtient chez un animal, si quelqu'un pouvait m'expliquer ...

Merci d'avance
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[invite02cefc91]

Bonjour,

Tu trouveras tes réponses ici :

http://fr.wikipedia.org/wiki/Anticorps

[invite02e16773]

Grosso modo:

Les anticorps polyclonaux sont obtenus en injectant à un animal (singe, chèvre, rat, souris, ou lapin, peut-être qu'il y en a d'autres) un antigène.
Puis on récolte les anticorps produits en masse dans l'organisme. On obtient donc une collection d'anticorps reconnaissant différents épitopes sur la protéine.

Les anticorps monoclonaux sont obtenus:
* Par hybridomes = injection de l'antigène chez un organisme, puis purification des lymphocytes B (dont chacun est spécifique d'un seul épitope) et fusion avec une lignée cellulaire "immortelle". Ensuite on place les cellules hybrides en dilution limite, de manière à obtenir un hybride par puits. On dispose donc de clones, chacun reconnaissant un seul épitope, et qui sécrètent à gogo l'anticorps pour lequel ils sont spécifiques.
On peut ensuite déterminer le ou les anticorps les plus réactifs pour sélectionner l'anticorps d'intérêt, puis démarrer une production en masse dans un bio-réacteur.
* Par phage-display = une banque d'ADN (plusieurs millions de séquences codants pour des anticorps tous différents) est transfectée dans des phages, de telle sorte que ceux-ci présentent (=display) les anticorps sur leur capside. On infecte cette banque de phage dans des bactéries (1 bactérie = 1 phage), on induit la formation de phages dans ces bactéries, puis on les teste tous, par FACS ou par ELISA: les phages positifs pour l'antigène vont se fixer à celui ci, les phages négatifs non.
Après un test, on a donc diminué significativement le nombre de phages négatifs.
On recommence ça plusieurs fois, jusqu'à obtenir des phages tous suffisamment affins pour l'antigène d'intérêt.
Comme les gens qui ont inventé la techniques sont malins, ils ont fait en sorte que si on prend les mêmes phages et qu'on les infecte dans d'autres bactéries, alors celles ci ne produisent plus des phages en masse couplés à l'anticorps ... Mais des anticorps solubles, adressé dans le périplasme. Un petit choc osmotique plus tard, tout le matériel périplasmique est en solution et peut être purifié => on peut tester les anticorps solubles, puis déterminer l'anticorps monoclonal le plus intéressant.

[invite82dc8b02]

Ok
Merci beaucoup pour ton explciation Guillaume69 :
c'était très clair !!

[A voir en vidéo sur Futura]