Extraction d'ADN ( ADN simple brin)

[invite29f11e40]

Salut tout le monde!
je sollicite votre aide, je suis entrain de mettre en place une technique d'extraction qui au final me donne de l'ADN simple brin... j'aimerai faire une purification sur colonne de silice, malheureusement j'ai l'impression que mon ADN n'est pas élué il reste accroché à la silice, car après avoir fait plusieurs real time en comparant ma technique avec une technique classique sur colonne de type Qiagen, les Cp sont très différent j'obtiens un Cp de l'ordre de 13 pour Qiagen et d'environ 20 pour ma technique. Je n'es pas précisée cette technique vise à extraire bactérie gram - gram + ainsi que les levures.

Merci d'avance!

toutes les suggestions sont les bienvenues
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[Flyingbike]

pourquoi vouloir du ssDNA ?

sinon pourquoi ne pas tout purifier puis digérer le double brin enzymatiquement ?

[invite29f11e40]

On ne veut pas particulièrement du simple brin mais malheureusement la technique que l'on veut mettre en place génère des simples brins....

[kamor]

Pour autant que je m'en souvienne, les colonnes échangeuses d'ions sont assez catastrophiques dans les rendements, mais le principe des colonnes Qiagen (ou autres) reposent sur le même principe.

La seule différence entre vos deux extractions, c'est le type de colonne utilisée ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite29f11e40]

bonjour,
je pense que j'ai pas donné assez d'informations, ma technique d'extraction est différente de celle de Qiagen ( protéinase K, sels chaotropique...), en tout point, sauf que j'utilise les différentes solutions ( AW1,AW2) de la compagnie Quiagen pour les différents lavages, et je dépose mon extrait( non purifié, extraction de type alcool et sels) sur une colonne de silice pour purifier, on utilise la solution de Qiagen le AE pour l'élution. Il est vrai que le rendement des colonnes de silice est faible 65% avec du dsDNA donc je suppose encore plus faible avec du ssDNA. après avoir analysé par real time toutes les fractions de lavage on a pas trouvé où on perdait notre ADN donc on s'est dit qu'il restait surement accroché à la colonne. j'ai déjà fait plusieurs élutions finale jusqu’à 6 pensant finir par décrocher l'ADN mais cette expérience n'a pas été concluante.

Merci!

[Yoyo]

Bonsoir,

POurquoi ne pas faire un chlorure de césium?

Yoyo

[invite29f11e40]

coucou,
merci pour ta réponse est ce que tu pourrais m'expliquer ton idée?