Résultat typique de FACS pour étudier le cycle cellulaire avec l’iodure de propidium

[invite6fef52bf]

Bonjour, je n'arrive vraiment pas à comprendre ce genre de graphique, comment justifiez l'identification de chaque phase du cycle cellulaire en fonction de l'intensité de la fluorescence ?
-----

[Guillaume69]

Salut,

Ils marquent quoi dans cette expérience ?

[invite6fef52bf]

Je sais que l'axe des abscisses correspond à l'intensité de la fluorescence en Ua et l'axe des ordonnés le nombre de cellules.
L'intensité de la fluorescence est directement proportionnelle à la quantité d'ADN possédée par chaque cellule.
C'est l'analyse d'une population cellulaire non synchrone marquée à l'iodure de propidium.

[Guillaume69]

Je pense à l'inverse que les cellules sont synchronisées, sinon tu ne peux rien interpréter ...

De plus, pour moi l'intensité de fluorescence n'est pas proportionnelle à la quantité d'ADN. Sinon, pourquoi expliquer un pic si énorme en G0 ou G1, et non après la phase S, en G2/M où la quantité d'ADN est doublée ?

Ce que je pense, c'est qu'en G0/G1, les cellules sont marquées => forte intensité de fluo.
En phase S, l'ADN simple brin est (globalement) séparé pour permettre la réplication => l'agent intercalant ne s'intercale plus => plus de fluorescence.
En phase G2/M, l'intercalant est de nouveau lié à l'ADN => la fluo augmente, de manière moindre car le signal a été dilué, et aussi probablement qu'à cause de la compaction de l'ADN,

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite6fef52bf]

J'ai oublié de dire que la surface des pics est proportionnelle au pourcentage de cellules dans chaque phase. Mais je comprend pas pour autant..

[Flyingbike]

Non. Les cellules sont bien asynchrones.

Le PI marque l'ADN. Le premier pic correspond aux cellules pré phase S, avec 2n ADN.
Le second pic marque les cellules a 4n.
Entre les deux ce sont toutes les cellules en cours de phase S donc avec des quantités d'ADN intermédiaires.

On voit que la majorité des cellules sont en phase G0 ou G1.

[invite6fef52bf]

A quoi correspond 2n et 4n ?

[Flyingbike]

voir ici (wikipedia)

[invite6fef52bf]

Merci beaucoup!

[Guillaume69]

Il y a un truc que je comprends pas ...

Là, parce qu'il est connu que les cellules sont majoritairement en G0/G1, vous avez expliqué ce qu'il était écrit sur le graphique.

Mais il me semblait que la question c'était : interpréter le graphique sans annotation, et en déduire les annotations. C'est à dire déduire à partir du simple graphique, que la majorité des cellules sont en G0/G1 ?

Je vois pas trop comment faire ... Sauf si l'on court-circuite l'exercice en supposant que les cellules sont synchrones (et en ayant donc tout faux)

[Flyingbike]

Un peu d'intuition : a partir du moment ou tu sais que l'intensité de fluo est proportionnelle a la quantité d'ADN, il faut remarquer qu'il y a un pic majoritaire centré sur une valeur x d'intensité, et un pic secondaire d'intensité a peu près 2x. En se demandant dans quelle situation la quantité d'ADN double, on remarque du meme coup qu'entre les deux il y a une population hétérogène avec une quantité d'ADN "non définie" qui a des chances de correspondre au nombre de cellules en phase S.

Si les cellules étaient synchrones, on aurait soit un pic de cellules en GO/G1 soit un pic en G2, mais en tout cas pas les 3 populations en meme temps.

[Guillaume69]

ok, je vois :]

Merci