Bonsoir !
J'ai une question très importante qui me donne mal à la tête depuis bien trop long temps!
Dans la technologie Gateway d'invitrogen, afin d'obtenir un clone d'entrée, on utilise deux sites de recombinaison spécifiques à savoir attB1 et attB2
dans un plasmide jouant le rôle de vecteur donneur et un fragment d'adn contenant le gène d'intérêt flanqué par deux autres sites attB1, attB2 (produit par PCR).
Après recombinaison, le gène d'intérêt a donc été transféré sur le plasmide donneur est cette fois flanqué de deux sites attL1 et attL2 qui sont les produits de la recombinaison : c'est le clone d'entrée.
OR j'ai lu dans plusieurs livres que 5'---attB---3' = 5'---BoB'---3' B et B' étant les "bras" et "o" le cœur homologue du site d'attachement,
de même attP = 5'---PoP'---3'
Ma question est : Quelles sont dont les séquences des sites attL1 et attL2 qui entourent le gène ? Car lorsque je fais la recombinaison sur papier j'obtiens un clone d'entrée contenant le gène flanqué par une séquence P1oB1' à gauche du gène, la quelle est, pour moi, équivalente à un site attR1 et une séquence B2oP2' à droite, la quelle est, pour moi, équivalente à un site attL2.... et non pas des sites attL1 et att2 (---attL1--gène--attL2---)
En effet pour moi attL1 serait équivalente à B1oP1'...
Y a t-il une orientation de base à avoir sur nos bras BoB' ou PoP' ???
Je crois que je m'embrouille, si quelqu'un pouvait m'aider, je lui en serait très reconnaissant (c'est un exposé pour la fac...)
Bonne soirée
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