Bonjour tout le monde!
Est ce que quelqu'un saurait comment fonctionne un kit d'extraction d'ARN messager??J'ai entendu parler des Dynabeads ® ce sont des billes magnétiques recouvertes d'oligo, mais après je sais pas comment les utiliser. Je suppose que les oligos doivent s'hybrider avec l'ARNm??
Merci
Bonjour,
La purification des ARNm se fait à l'aide de billes couplées à des oligoDT. L'idée est de mettre tes ARN totaux en présence de ces billes, les ARNm vont se fixer aux oligoDT par l'intermédiaire de la queue polyA. Ensuite tu laves sur une colonne et tu fais une élution tout bête. Voilà en gros le principe
malesore tu as raison dans le principe, sauf que pour ces billes je crois qu'il n'y a pas besoin de colonnes. Il faut juste un portoir magnétique pour retenir les billes ayant fixé les ARNm par la queue polyA pendant le lavage, puis ensuite l'élution.
Effectivement, mais tout dépend du kit !
Chez Qiagen, c'est des colonnes il me semble car les billes ne sont pas magnétiques ...
Effectivement
Qiagen classique (comme la plupart des kits sur colonne) c'est purification des ARN totaux (sauf petites tailles) sur silice.
Dynabeads ne purifie que les messagers polyA +, et c'est magnétique.
Re : Extraction d'ARNm
Merci à tous pour vos réponses.
Par contre je ne vois pas du toit comment isoler les ARNm des ARN totaux? Sinon a par ces billes magnétiques qui ont un coût important, existe t-il un autre moyen d'isoler les ARNm??
Pas nécessairement magnétiques, comme je le dis plus haut, le kit de chez Qiagen (Oligotex) est basée sur des colonnes de silice avec des rinçages. Les ARNm sont retenus par les billes et les différents rinçages enlèvent les ARNr non fixés
Et je voudrais pas dire de connerie mais il me semble que les ARNm des cellules procaryotes n'ont pas de queue poly A. Donc il doit bien exister un autre moyen....
Je vais devenir folle !!
En effet, les queues polyA chez les procaryotes sont un signal de dégradation contrairement aux eucaryotes ou elles stabilisent l'ARNm. POu rl'extraction des ARM chez les procaryotes, tu peux utiliser des kits genre "ribominus" qui vont eliminer l'ARNr. Ce n'est pas du 100% mais c'est quand meme assez efficace.Envoyé par d3b_26
Et je voudrais pas dire de connerie mais il me semble que les ARNm des cellules procaryotes n'ont pas de queue poly A. Donc il doit bien exister un autre moyen....
Je vais devenir folle !!
YOYo
