problème marquage Agilent one-color

[inviteffc39746]

Bonjour à tous !

Je viens vers vous car j'ai un petit soucis au niveau de mes marquages d'ARN en une couleur (cy3). Je suis le protocole Agilent à la lettre. Sachant que c'est l'ancien kit (quick amp labelling kit)
Sur une série de marquage je me retrouve avec des marquages qui ont un très bon rendement (environ 350ng/µl) et une activité spécifique normal (> à 10) mais j'en ai d'autres où je n'ai que très peu de rendement (genre 30ng/µl) mais surtout qu'il n'y a eu aucune incorporation de cyanine. Je précise que je marque sur 500ng. Je suis sûre de moi au niveau des pipettages. J'ai eu un jour un problème à ce niveau là donc je fais maintenant hyper attention et mes résultats n'étaient pas de ce type là c'était plutôt des variations de l'ordre de 100ng/µl mais avec incorporation de cyanine.
Je me posais la question si ça ne pouvait pas venir des colonnes de purification (RNeasy Mini Kit de Qiagen) qui seraient défectueuses. Si vous avez des pistes ou si ça vous est déjà arrivé dites le moi svp.

Merci d'avance pour vos réponses
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[inviteffc39746]

Personne alors ? Jamais de problème dans les manip Agilent ou avec les kit qiagen ?

[inviteffc39746]

un petit up

[invite03bd9316]

Bonjour Jugen,

j'ai actuellement le même problème que vous concernant l'incorporation de la Cyanine, vos messages datent d'il y a 3 ans, avait vous trouver une solution depuis ?

Merci,

Bien cordialement.

[A voir en vidéo sur Futura]