Clonage

[inviteafc77f31]

Bonjour,

Il est possible d'obtenir de grande quantité de protéine en le faisait produire par des bactéries ayant reçu le plasmide recombinant contenant le gène cible.

Quelque chose me dérange dans cette technique. Je ne vois pas comment elle peut fonctionner.

On isole le gène d'une cellule eucaryote grâce a une PCR puis on l'introduit dans le génome de la bactérie.

Comment une bactérie peut elle traduire ce gène, ou plus précisément comment peut elle synthétiser la bonne protéine grâce a ce gène.

Ce gène contient des introns et les cellule procaryote sont incapable de réaliser l’épissage. Ainsi la protéine devrais y être modifié.

Merci d'avance
Jerome Avellaneda
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[piwi]

Bonjour.

Voilà deux erreurs conceptuelles:
1. le gène n'est pas amplifié ici, c'est son transcrit, l'ARNm, qui va être rétro transcrit en ADNc (donc dépourvu d'introns).
2. le plasmide n'est pas introduit dans le génome de la bactérie. Il est inséré dans la bactérie, mais se réplique de manière autonome. Il est d'ailleurs transcrit sous le contrôle de son propre promoteur.

Cordialement,
piwi

[invite74b9e03b]

Salut,

En général on préfèrera utiliser un gène sythétique (à condition de connaître la séquence, bien évidement) dans lequel on aura mis les exons qui nous interesses (On envoi la sequence à une boîte de biotech qui nous renvoi un plasmide contenant cette sequence), en plus, de cette manière on peut accommoder les codons qui vont bien avec la souche. Et ensuite de manière générale pour exprimer une grande quantité de protéine eucaryote on essai de voir si cela fonctionne dans une bactérie (quand ca marche c'est génial car c'est très facile à mettre en place, c'est pas cher et ca fonctionne très bien) malheureusement ca ne fonctionne pas souvent donc on passe dans des système d'expression eucaryote (levures, cellules d'insectes). Se pose aussi le problème des modifications post traductionnelles, et dans ce cas on essai dans des levures humanisées par exemples (après tout dépend de ce que tu veux faire avec ta protéine: etudes structurales, fonctionnelles ou production pharma). Et en effet pour l'expression en bactéries on utilise un plasmide qui reste sous cette forme, il ne s'intègre pas dans le génome.

Camu

[piwi]

En général on préfèrera utiliser un gène sythétique (à condition de connaître la séquence, bien évidement) dans lequel on aura mis les exons qui nous interesses (On envoi la sequence à une boîte de biotech qui nous renvoi un plasmide contenant cette sequence), en plus, de cette manière on peut accommoder les codons qui vont bien avec la souche.

C'est un peu la solution du riche ça non? A moins que les prix aient considérablement baissés, je ne m'intéresse plus directement à ces questions depuis plusieurs années.

Il y a aussi un souci possible avec les bactéries, certains codons eucaryotes ne sont pas très bien processés par les souches classiques, ce qui entraine un certain nombre d'erreurs et peut être à l'origine d'une efficacité de production réduite. On peut bricoler, ou se procurer des bactéries, génétiquement modifiées cette fois ci, pour corriger cela.

Cordialement,
piwi

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite74b9e03b]

Oui, ca parait une solution de riche mais effectivement les prix ont bien baisser et surtout c'est un gain de temps considérable. En plus ca permet de résoudre les problèmes des codons d'usage, en donnant à l'entreprise dans quel type de bactérie on souhaite travailler, elle va syntéthiser le gène avec les codons d'usage de la bactérie.

Camu