Bonjour,
j'ai quelques difficultés dans mon cours de biotechnologies au sujet du fonctionnement du phage M13.
Si j'ai bien compris le phage M13 est un phage possédant un ADN simple brin qui infecte les bactéries possédant uniquement le pilus F dans lesquelles il duplique son génome sous forme RF puis au bout de plusieurs cycles de réplication on aura uniquement synthèse asymétrique du brin initial sans lyse des bactéries.
dans le cas de son utilisation pour le clonage d'ADNc, on insère le brin d'ADNc sous forme simple brin ou bien sous forme double brin ? Est ce qu'on fabrique ces plasmides M13 pour clonage à partir de la forme réplicative ou bien à partir de la forme initiale avant duplication ?
Enfin il me semble qu'on utilise des bactéries spéciales possédant un épisome F' contenant une résistance à la tétracycline pour son maintient. Est ce que ces bactéries possèdent aussi un opéron lactose ne synthétisant qu'une partie de la beta galactosidase de manière à ce qu'il y ai un gène marqueur?
dans ce cas est ce que le phage M13 possède lui aussi un opéron lactose par exemple codant uniquement pour le peptide alpha qui serait complémentaire de la partie de la beta galactosidase synthétisée par la bactérie et dans le cas où notre ADN d'intérêt aurait été inséré on aurai plus de synthèse de la beta galactosidase?
Merci d'avance,
Bonne journée
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