Bonjour,

je suis actuellement en révision et j'ai quelques problèmes avec la compréhension du cours de biotechnologies,

Nous avons étudiés les différents moyens de cloner de l'ADN et en particulier l'utilisation de plasmides et de phages et des vecteurs dérivés de ces outils.

j'ai compris que les vecteurs types pbluescript, pGEMt et Topo possèdent :
    les caractéristiques des plasmides (origines de réplications plasmidiques, 1 ou plusieurs gènes de sélection c'est à dire de résistances à un antibiotique, un gène marqueur l'opéron lactose qui lorsque l'ADN d'intérêt sera inséré ne permettra plus la synthèse de la beta galactosidase et donc la formation de colonies bleues sous l'action du Xgal et de l'IPTG)
      des caractéristiques phagiques comme une origine de réplication phagique F+ ou F- avec réplication dans le sens de l'opéron lactose ou dans le sens opposé ( lié au sens d'insertion de l'ADN d'intérêt ou bien aux caractéristiques du phage M13 de ne synthétisé qu'un brin d'ADN dans le cas ou l'infection est réalisée avec un phage helper ?)
      Voila déjà je ne sais pas à quoi est lié cette différence entre F+ et F- et si dans le cas où elle serait due à la deuxième hypothèse en quoi le fait d'ajouter un phage helper permet de ne synthétiser qu'un brin ? est ce que c'est du au fait qu'il va synthétiser des protéines spéciales ?

      Ensuite dans le cas du phagemide lambda zagII j'ai compris qu'en gros le vecteur est composé du bras gauche et droit du phage lambda et que la partie centrale a été remplacé par le pbluescript avec l'ADN d'intérêt et qu'apparemment la co-infection avec un phage helper permet ensuite son excision.
      Toujours la même question que toute à l'heure , quel est le rôle de ce phage helper et comment permet-il cette excision.

      Voila globalement j'ai compris la description des outils mais pas vraiment leur fonctionnement.
      Merci d'avance pour vos explications,

      Bonne journée