adn et police scientifique TPE help svp !

[melc12000]

Bonjour,
Voilà je dois rendre mon examen sur les TPE mercredi au sujet de la police scientifique, j'ai donc consacré une partie à l'ADN et technique d'identification mais il y a quelques notions que je n'ai pas entièrement bien saisies =/ je m'explique:

l1) déjà, lors de la PCR, qu'est-ce qui fait que telle séquence sera amplifiée et pas une autre? (comment on le détermine?)

2) Lors de l'électrophorèse, on compare des tailles de fragments différentes mais, lors de la PCR on n'obtient pas DES fragments mais une seule et même séquence donc je ne comprends pas =/

3) Donc je pense peut-être qu'on "coupe" cette séquence de PCR (qui me parait pourtant déjà bien réduite) avec des enzymes de restriction pour ensuite pouvoir procéder à l'electrophorèse. Mais je sais qu'en criminalistique, on ne se sert que des introns (séquence non codante), (pour raisons éthiques) or je croyais que les enzymes de restriction étaient spécifiques aux gênes (or gêne absent sur les séquences non codantes) donc là aussi je bloque...(à moins qu'elles agissent sur un site de restriction pas forcément propre aux gènes)

4) ces introns sont-ils biens différents pour chaque individus ou est-ce qu'il s'agit uniquement des exons (séquence codantes) ?



Merci de bien vouloir me répondre au plus vite svp (c'est pour ce mercredi ! aie)
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[invite6e3ae6c5]

bon, je vais t'apporter quelques informations tirées de mes brèves connaissances dans la matière. Si d'autres personnes veulent compléter, elles sont les bienvenues !

1) dans une PCR, on utilise des amorces ADN spécifique qui doivent délimiter les séquences du gènes (se placer à sa bordure). les TAQ polymérases copient l'ADN en partant de cette amorce, ce qui lui permet donc de copier que le gène qui a été délimité et non pas l'ADN en entier. Lors des premiers cycles, la polymérase continue plus loin que la fin de l’amorce mais petit à petit la séquence pure est obtenue.

2) pour l'électrophorèse, je ne veux pas dire de bêtises, mais je ne pense pas qu'on l'utilise avec le PCR, on l'utilise plutôt avec le Southern Blot. Avec le PCR tu connais déjà la taille du gène,donc tu n'en n'as pas besoin, tu peux simplement connaître la quantité en utilisant des techniques de fluorescence.
on peut cependant utiliser une électrophorèse après avoir obtenu le gène si l'on essaie de déterminer sa séquence. Dans ce cas, l'electrophorèse fait parti du séquençage de Sanger.

3) les enzymes de restriction ne sont pas spécifiques aux gènes mais à des séquences, si la séquence se trouve dans un intron, elle va couper quand même.

4) les introns sont bien différents pour chaque individu.

[melc12000]

merci d'avoir pris le temps de me répondre mais:

1) Oui je suis d'accord que ce n'est pas la molécule entière qui est amplifié mais juste une séquence spécifique. (mais pourquoi telle séquence et pas une autre??)

2) Si on n'utilise pas l'életrophorèse avec la PCR mais avec le Southern Blot, a quoi ça sert de multiplier des milliers de fois une séquence ? je pensais qu'on pouvais faire migrer ces fragments par milliers (de la PCR) avec l'électrophorèse et que comme ils ont la même taille, ça permettrais de voir à l'oeil nu si elle correspond à une séquence spécifique d'un éventuel suspect en les faisant migrer en même temps sur la même électrophorèse.. Du coup je ne vois plus l'utilité de la PCR. Ok ça permet d'en avoir "en stock" pour d'éventuelles contre-expertises mais dans ce cas, pas besoin d'en avoir des MILLIERS non ?

2') Avec le Soutern Blot, c'est le génome entier d'une cellule qui est séparé par les enzymes ou juste une portion d'ADN?

[invite6e3ae6c5]

De rien ...

1) Très souvent le chercheur veut travailler sur un gène en particulier, pour trouver des anomalies, pour établir la séquence ... donc il n'amplifie qu'un gène car ça ne sert à rien d'amplifier l'ensemble de l'échantillon, ce serait beaucoup trop long pour lui de déterminer la séquence entière et de noter toutes les anomalies, et ça ne servirait pas à grand chose.

2) Multiplier la séquence avec le PCR sert à obtenir un gène en un nombre de fois suffisamment grand pour pouvoir travailler dessus. Si on n'a qu'un tout petit échantillon, on ne peut pas le faire. Dans le cadre de la police scientifique, sur une scène de crime, on a rarement la chance de trouver une très grande quantité d'ADN, c'est souvent tout juste si on trouve quelques cheveux. Dans ces maigres échantillons, la quantité d'ADN est trop petite pour pouvoir être étudiée, c'est pourquoi les scientifiques la multiplie pour la rendre plus conséquente.:
Alors, oui, évidemment, tu peux faire migrer tes échantillons du PCR sur un électrophorèse, à condition que tu es un autre échantillon "témoin" pour comparer. Faire migrer seulement les échantillons du PCR ça ne sert à rien, mais les faire migrer à côté d'un autre échantillon, c'est utile pour les départager. Au temps pour moi, dans ce cas, tu utilises bien l'électrophorèse avec le PCR. Par contre il faut quand même que tu en ais beaucoup, parce que si tu n'as que quelques fragments, ils n'apparaîtront quasiment pas à l'électrophorèse. Il faut avoir beaucoup d'ADN pour former une bande conséquente.

2') Avec le Southern Blot c'est le génome entier puisque tu pars des cellules elles -mêmes. Et ensuite, sur l'électrophorèse, tu choisis les gènes qui t'intéressent en les fixant avec une sonde !

[A voir en vidéo sur Futura]