Bonjour tout le monde
je vais exprimer une protéine dans un système bactérien (Ecoli BL21) le problème c'est que la protéine possède un site de glycosylation.
Quels problèmes peut poser ce site??
Qu'est ce qu'on peut faire pour avoir une bonne expression d'une protéine ayant un site de glycosylation ??
Merci d'avance pour toute aide
Salut
Le probleme est qu'elle ne sera pas glycosylée chez E. coli. Donc si cette modification est importante pour son activité, ta protéine ne sera pas active.
La seule solution dans ce genre de cas est de passer dans un système d'expression eucaryote, genre levure ou plus complique en un systeme de baculovirus.
YOyo
Merci Yoyo pour votre repense
Je pensait que la glycosylation d'une protéine représente en elle même un problème par exemple l'Asn disponible va accrocher des sucres présents dans le milieu de culture ceci va engendrer la formation de courtes chaînes et donc on dispose pas de la bonne protéine (je ne sais pas si cette information est exacte ou pas).
Le site de glycosylation de ma protéine n'a pas d'effet sur son activité biologique donc je peux tenter le système d'expression bactérien
Une glycoprotéine, ça s'exprime en général très mal en bactérie. Les N-glycosylations jouent un role central dans le repliement des glycoprotéines et leur suppression se traduit souvent par l'aggrégation massive de la protéine. Tu la verras sur un gel mais elle sera probablement incapable de quoi que ce soit.Envoyé par rayhana-b21
Merci Yoyo pour votre repense
Je pensait que la glycosylation d'une protéine représente en elle même un problème par exemple l'Asn disponible va accrocher des sucres présents dans le milieu de culture ceci va engendrer la formation de courtes chaînes et donc on dispose pas de la bonne protéine (je ne sais pas si cette information est exacte ou pas
Le site de glycosylation de ma protéine n'a pas d'effet sur son activité biologique donc je peux tenter le système d'expression bactérien
Bonsoir,
On peut aussi conseiller l'expression par les CHO, système relativement simple et de multiples transfections largement documentées. L'Asn seul ne suffit pas à "accrocher" les sucres, l'environnement autour de l'Asn ainsi que de nombreuses enzymes sont impliqués. Dans ces conditions, je ne crois pas qu'une "greffe" spontanée soit possible.
Concernant l'activité de la protéine produite en système E.coli, je serais plus modéré que Svenn, les fonctions sont tout de même préservées, en général.
Merci à tous pour ces informations qui me sont très utiles
Bonne soirée
