comment detecter les mutation d'un gène trop long??

[invite965bd8d1]

est ce que quelqu'un peut m'aider?
je veut detecter les mutations qui peuvent figurer sur les exons d'un gène eucaryote de 28 exons qui sont trops distancés les uns par rapport aux autres (car les introns sont trop longs). à votre avis quelle est la méthode la plus simple, la plus courte et la moins coûteuse qui permettra la detection des mutations??....de mon coté j'est trouvé que la pcr multiplexe disons peut marcher mais le séquençage de 28 fragment un par un et pour une centaine d'individus c'est vraiment trop difficile et trop couteux....qu'est ce que vous pensez??...à ma place que feriez vous??...je me demande également si le passage par ARN>>ADNc>>PCR>>séquençage de 4 ou 5 fragments et faisable ou il y a mieux?? y a-t-il quelqu'un qui l'a déja effectué?? j'attend vos idées, vos experiences, vos suggstions ...et merci d'avance
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[inviteb3a6feac]

Bonsoir !

Une analyse par "exon sequencing" ou par puce à ADN (soit montée soi-même, très long à faire mais meilleur marché, ou alors chez Affymetrix, très cher ) semblent plus pratiques et plus rapides.

Cordialement
Nowell

[invite965bd8d1]

Merci pour votre aide Nowell, est ce que vous pouvez m'eclaircir un peu plus les outils nécessaires pour ces techniques...car finalement je ne dispose que d'un thermocycleur et d'un séquenceur? est-ce suffisant ?? pour les produits je peut les commander mais les automates..?!!!

[invitec9f0f895]

Salut

Pourquoi tu ne fais pas une RT-PCR à partir de l'ARNm et tu sequences le cDNA obtenu? C'est encore la solution la plus simple, tu n'as qu'un seul fragment à séquencer.

Yoyo

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite965bd8d1]

merci Yoyo pour la réponse, effectivement, j'ai pensé à l'ARNm mais est-ce-qu'il sera obligatoire d'extraire l'ARNm à partir du tissu spécifique au gène? ou bien on peut le trouver au niveau du sang périférique?
si tu peut également me répondre pour les outil ou produits qu'exige la technique d'exome sequencing je te remércie d'avance.