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Vecteurs de clonage



  1. #1
    biomol05

    Vecteurs de clonage

    Bonjour,

    Ma question est :

    Vous avez obtenu par criblage d'une banque d'ADNc la séquence suivante correspondant à l'ARNm d'une nouvelle protéine.

    ADNc: 1.....tcatcggctc tgcaccatgg cctccctggc cgcgctcctg cccctgctgg ccctgctggt
    61....cctctgcaga ctggatcctg cccaggcctt cgtcaaccag cacctgtgcg gctctcacct
    121....ggtggaggcg ctgtacctgg tgtgcgggga gcgcggcttt ttttatacac ccaagtcccg
    181....ccgcgaggtg gaggagctgc aggtggggca ggcggagctg ggcggggggc ccggcgcggg
    241....cggcctgcag ccctcggcgc tggagctggc cctgcagaag cgcggcatcg tggagcagtg
    301....ttgcaccagc atctgctcgc tctaccagct ggagaactac tgcaactagg ggtgcccccc
    361....acccacccct gcccgcgccc cccacgcccc ccgccctcgc ccccacccaa taaacccctc
    421....cacgcgcccc ggg

    Vous désirez produire cette protéine dans les bactéries afin de pouvoir étudier ses propriétés en laboratoire. Lequel des types de vecteurs suivants choisirez-vous?
    pBr322
    pGL2
    PinPoint Xa-1

    Voilà, je ne comprends pas ce que je dois chercher dans les images des vecteurs.
    Si qqun peut m'aider, ça serait très apprécié

    Merci !

    -----


  2. #2
    piwi

    Re : Vecteurs de clonage

    Bonsoir.
    Vous devez pouvoir produire la protéine, ce qui signifie que la séquence codante va être transcrite et traduite. Le traduction va s'opérer grâce à la machinerie bactérienne, pas de souci. En revanche, la transcription va nécessiter la présence d'un promoteur sur le vecteur, c'est la première chose que vous devez chercher. Ceux qui n'en ont pas sont à éliminer. Ensuite, il faudra que vous verifiez 1. qu'un des sites de restriction de la cassette de clonage peut être utilisé (le site de restriction ne se trouve pas dans votre séquence codante), et 2. que ce site permet un clonage en phase avec un éventuel start de transcription présent sur le vecteur (vérifier aussi si il y en a un ou pas d'ailleurs). Si les deux derniers points ne sont pas réunis, il vous faudra faire quelques adaptations durant votre clonage (créer un site de clonage, adapter des amorces PCR)

    Bon courage.
    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

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