Vecteurs de clonage

[invitedb45f0cd]

Bonjour,

Ma question est :

Vous avez obtenu par criblage d'une banque d'ADNc la séquence suivante correspondant à l'ARNm d'une nouvelle protéine.

ADNc: 1.....tcatcggctc tgcaccatgg cctccctggc cgcgctcctg cccctgctgg ccctgctggt
61....cctctgcaga ctggatcctg cccaggcctt cgtcaaccag cacctgtgcg gctctcacct
121....ggtggaggcg ctgtacctgg tgtgcgggga gcgcggcttt ttttatacac ccaagtcccg
181....ccgcgaggtg gaggagctgc aggtggggca ggcggagctg ggcggggggc ccggcgcggg
241....cggcctgcag ccctcggcgc tggagctggc cctgcagaag cgcggcatcg tggagcagtg
301....ttgcaccagc atctgctcgc tctaccagct ggagaactac tgcaactagg ggtgcccccc
361....acccacccct gcccgcgccc cccacgcccc ccgccctcgc ccccacccaa taaacccctc
421....cacgcgcccc ggg

Vous désirez produire cette protéine dans les bactéries afin de pouvoir étudier ses propriétés en laboratoire. Lequel des types de vecteurs suivants choisirez-vous?
pBr322
pGL2
PinPoint Xa-1

Voilà, je ne comprends pas ce que je dois chercher dans les images des vecteurs.
Si qqun peut m'aider, ça serait très apprécié

Merci !
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[piwi]

Bonsoir.
Vous devez pouvoir produire la protéine, ce qui signifie que la séquence codante va être transcrite et traduite. Le traduction va s'opérer grâce à la machinerie bactérienne, pas de souci. En revanche, la transcription va nécessiter la présence d'un promoteur sur le vecteur, c'est la première chose que vous devez chercher. Ceux qui n'en ont pas sont à éliminer. Ensuite, il faudra que vous verifiez 1. qu'un des sites de restriction de la cassette de clonage peut être utilisé (le site de restriction ne se trouve pas dans votre séquence codante), et 2. que ce site permet un clonage en phase avec un éventuel start de transcription présent sur le vecteur (vérifier aussi si il y en a un ou pas d'ailleurs). Si les deux derniers points ne sont pas réunis, il vous faudra faire quelques adaptations durant votre clonage (créer un site de clonage, adapter des amorces PCR)

Bon courage.
piwi