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culture cellulaire de cellules souches



  1. #1
    biologie-biochimie

    culture cellulaire de cellules souches

    Bonjour à tous,

    je suis actuellement entrain d'essayer de faire pousser des cellules souches neuronales (dans le cadre d'un projet scientifique de master sur les maladies neurodégénératives)... Cependant, au bout du deuxième jour de culture, mes cellules s'arrondissent et finissent par mourrir...
    Je pense que le problème vient du coating.

    Pourriez vous me donner vos conseils...
    Merci d'avance

    -----


  2. #2
    nowell

    Re : culture cellulaire de cellules souches

    Bonjour,

    Je fais de la culture de neurosphères en routine, exposez moi plus précisément votre problème.

    Précisez d'abord vos termes employés: Des cellules souches neuronales, ça n'existe pas, ce sont des cellules souches neurales, ou alors des progéniteurs neuronaux, ce n'est pas la même chose ^^
    Si vous désirez maintenir une culture, pourquoi coatez vous déjà votre boîte (ou lamelle) ?

    Donnez moi la composition de votre milieu de culture. A partir de quoi lancez vous votre culture, est-ce une culture primaire ou secondaire ?

    Cordialement
    nowell
    Si les faits ne correspondent pas à la théorie, changez les faits. (A. Einstein)

  3. #3
    biologie-biochimie

    Re : culture cellulaire de cellules souches

    bonjour,

    ce sont des cellules souches embryonnaires neuronales. Je pense avoir trouvé le problème : la fibronectine utilisée pour coater les boites...

  4. #4
    nowell

    Re : culture cellulaire de cellules souches

    Ah en effet

    La fibro est un répresseur du pathway neuronal.
    Une cellule souche embryonnaire neuronale, ça n'existe pas. je ne ne comprends toujours pas ce que vous désirez faire.
    Vous voulez maintenir les cultures longtemps à l'état indifférencié, ou vous voulez faire une culture de neurones différenciés ?

    SI c'est la première solution, vous ne devez pas coater vos boîter et dans l'idéal prendre des flasques non adhérentes, avec un milieu de culture à base de neurobasal, ou de DMEM/HAM F12, B27, glutamine, et facteurs mitogènes (EGF, bFGF) à haute concentration.
    SI vous désirez maintenir une culture de neurones primaires, il faut les sélectionner à partir de l'état de stem cell, et donc coater les boïtes à la laminine (pour avoir une substrat orientant) ou à la poly lysine ou à la poly ornithine pour avoir un substrat neutre, et ajouter dans le milieu de base neurobasal de l'acide rétinoïque, du sérum, et des facteurs mitogènes à très basse concentration, en ajoutant biensur B27 et glutamine.

    Cordialement
    Nowell
    Si les faits ne correspondent pas à la théorie, changez les faits. (A. Einstein)

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