Confirmation de l'insertion d'un gène dans un plasmide

[Biologiste16]

Bonsoir à la chère communauté FS,

Je travaille actuellement sur un clone et je veux savoir s'il est possible de confirmer une ligation entre un gène et un vecteur plasmidique ? et par quelle méthode puis¬je la faire ?
Faut¬il vraiment que ce gène soit exprimé dans la bactérie pour le savoir ? alors que tout ca prend énormément de temps, y a t il une méthode plus rapide ?
Comme sur un gel d'électrophorèse par exemple ! J'ai pensé à ca mais je ne suis pas très sûre du résultat, je devrai visualiser juste une seule bande, sachant que la taille de mon gène est de ~880pb et le plasmide que j'utilise est de ~7900pb donc en principe j'aurai une bande de ~8700pb . Est¬ce une méthode correcte ?
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[piwi]

Oui c'est toujours comme cela que l'on fait d'ailleurs. On établit la carte de restriction du plasmide en utilisant des enzymes de restriction. A minima, une enzyme de restriction qui ne coupe qu'une fois permettra de linéariser le vecteur et d'en trouver la taille en faisant migrer le produit de digestion dans un gel d'agarose.

Cordialement,
piwi

[Biologiste16]

C'est effectivement ce que je voulais savoir, il me manquait juste le détail de l'enzyme de restriction.

Thank you.